储存条件 : 18-25℃保存，有效期2年。

单位 : 盒

保存：18-25℃保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件下操作。无菌条件下操作，启封后置于常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

试剂盒内容：

样本稀释液       200mL

清洗液          200mL

脾脏组织淋巴细胞分离液      200mL

淋巴细胞分离方法

1.        制备脾脏的单细胞悬液。

2.        取一支适当的离心管，加入与脾脏单细胞悬液等量的分离液（分离液最少不得少于3 mL，总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果）。

3.        小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将形成明显的分层界面。）

4.       

5.        离心后，此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层；第二层为环状乳白色淋巴细胞层；第三层为透明分离液层；第四层为红细胞层。

6.        用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的15mL离心管中，向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞，250g，离心10min。

7.        弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心10min。

8.        重复步骤7

9.        弃上清，细胞重悬备用。

分层示意图

脾脏单细胞悬液的制备方法

脾脏研磨的方法：

1.        无菌条件下摘取脾脏，撕去脾脏被膜，用眼科剪将脾脏剪成小块。

2.        将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证脾脏及获得的细胞处于液体环境中）。

3.        将脾脏放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨脾脏（尽量控制研磨力度，保持筛网悬空，避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡）

4.        研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞悬液，再经滤网过滤。   

注：

A.      可用酶消化法，使用胶原酶对脾脏组织进行消化，得到单细胞悬液。

B.       如果最终得到的细胞需要培养，那全过程所需试剂与器材均要求无菌。

C.       根据脾脏的体积控制单细胞悬液的浓度在10⁸~10⁹个/mL。

注意事项：

A.      开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。

B.       分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C.       待分离的组织要求新鲜，避免冷冻和冷藏。

D.      部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。

如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在制备单细胞悬液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生物污染。