使用说明：
1. 细胞培养(以六孔板为例，其它培养板或培养皿参考六孔板)：在转染前一天(18-24小时)把约20-60万细胞(具体的细胞数量据细胞类型、大小和细胞生长速度而定)培养到六孔板内，使第二天细胞能达到约60-70%。
2. 在进行下述转染步骤前，把培养有细胞的六孔板每孔换成2ml新鲜培养液(含有血清，不含抗生素)。可以使用含有血清并含有抗生素的新鲜培养液，但抗生素的存在对于有些细胞容易导致转染后出现一定的细胞毒性。
3. 参考下表，对于待转染的六孔板中每一个孔的细胞，取两个洁净无菌离心管，分别加入125μl不含抗生素和血清的DMEM培养液(高糖DMEM或低糖DMEM均可)或Opti-MEM^® Medium，然后于其中一管加入2.5μg质粒DNA，并用枪轻轻吹打混匀；另一管加入5μl Lipo293?转染试剂，用枪轻轻吹打混匀，请特别注意不可Vortex或离心。将含有DNA的培养液用枪轻轻加入含Lipo293?转染试剂的培养液中，轻轻颠倒离心管或者用枪轻轻吹打混匀，室温静置15分钟(室温存放6小时内稳定)。

注1：对于六孔板中一个孔的细胞，Lipo293?转染试剂的用量可以在3-12.5μl内进行适当调节，DNA用量可以在1-4μg的范围内进行适当调节。质粒用量(μg)和Lipo293?(μl)的用量1:2比较常用。最佳的转染条件，因不同细胞类型和培养条件而定，可以在上述推荐范围内自行优化转染条件。
注2：对于多个孔转染相同数量相同质粒的情况，可以把每个孔所需的Lipo293?转染试剂和DNA混合物分别配制，然后一起混合在同一个离心管内，后续混匀并孵育20分钟后，可以按照推荐用量滴加到细胞培养器皿内。
注3：对于其它培养板或培养器皿，各种试剂的用量可以按照细胞培养面积按比例进行换算。如果转染RNA或寡核苷酸等可以参考转染DNA的条件进行。
4. 按照六孔板每孔250μl Lipo293?转染试剂-DNA混合物的用量，均匀滴加到整个孔内，随后轻轻混匀。
5. 继续培养约24-48小时后，即可用适当方式检测转染效果，例如荧光检测、Western、ELISA、报告基因等，或加入适当的筛选药物如G418等进行稳定细胞株的筛选。

常见问题：
1. 转染效率低：
a. 优化质粒与Lipo293?转染试剂比例，适当加大质粒用量。
b. 应使用高纯度、无菌、无污染物的质粒进行转染，DNA纯度方面A₂₆₀/A₂₈₀比值要接近1.8，通常宜控制在1.8-1.9范围内，偏低则有可能有蛋白污染，偏高则有可能有RNA污染。可以使用碧云天生产的质粒大量抽提试剂盒(D0026)进行抽提，以保证可以获得较高的转染效率。
c. 需用无抗生素和无血清培养液配制Lipo293?转染试剂和质粒的混合物。
d. 细胞转染时应状态良好，并且使用本产品时细胞密度达到60-70%时最适合进行转染，过稀或过密都可能影响转染效率，不同细胞的最佳转染密度需要自行摸索。
e. 转染后培养时间不足，而被误认为转染效率偏低。细胞转染后至显著表达所需培养时间通常为24-48小时。
f. 检查细胞是否支原体感染，支原体感染会影响细胞增殖，并很可能影响转染效率。
g. 如果没有检测到目的蛋白表达，应该仔细核对转染质粒的测序结果，确保测序结果和读码框完全正确。启动子、复制起始位点、质粒大小都会影响基因表达水平。
2. 出现一定的细胞毒性：
a. 转染前，细胞至少铺板18-24小时。
b. 目的基因的表达蛋白有毒性。此时可以和空载质粒转染效果比较，以确定是否是目的基因蛋白表达对细胞产生毒性。如果确定有细胞毒性，可以考虑适当减少质粒用量，并按照比例减少Lipo293?转染试剂。
c. 检查是否转染时细胞密度太低。
d. 检查细胞是否有支原体等微生物污染。

附录：
常用多孔板和培养皿的尺寸、培养面积、细胞培养量和推荐的培养体积等相关数据表：

  *Diameter and growth area may vary depending on the manufacturer, and the listed sizes are from Corning.
  **These wells or dishes are square.

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