碧云天的蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) (Protease inhibitor cocktail for bacterial cell extracts, 100X) 是一种用于细菌蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物(23mM AEBSF, 2mM Bestatin, 0.3mM E64 and 2mM Pepstatin A in DMSO),并提供独立包装的0.1M EDTA。
细菌提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等,容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰,从而影响后续的蛋白检测。因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
本产品为经优化和测试的用于细菌蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物,包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。具体组分与Sigma及Millipore同类产品的比较见表1。
表1. 碧云天蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X)与Sigma及Millipore同类产品的比较:
品牌 | Beyotime | Sigma | Millipore |
产品编号 | P1025 | P8465 | 539132 |
产品形式 | 100X | 100X | 如配制为100X |
AEBSF | 23mM | 23mM | 20mM |
Bestatin | 2mM | 2mM | 1.7mM |
E64 | 0.3mM | 0.3mM | 0.2mM |
Pepstatin A | 2mM | 0.3mM | 2mM |
EDTA | 100mM | 100mM | 85mM |
本蛋白酶抑制剂混合物含23mM AEBSF, 2mM Bestatin, 0.3mM E64, 2mM Pepstatin A (参考表1),配制在高纯度DMSO中。EDTA为单独包装,以便选择性使用。如用于检测金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA。
本产品使用便捷,通常以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X)和0.1M EDTA加入裂解液中,即可用于细菌蛋白的提取,并有效抑制蛋白降解。
不同类型的蛋白提取物中含有不同类型的蛋白酶。例如,哺乳动物细胞提取物中通常含有高丰度的丝氨酸蛋白酶,细菌细胞提取物通常含有较多的丝氨酸蛋白酶和金属蛋白酶,哺乳动物组织提取物中主要含有丝氨酸、半胱氨酸和金属蛋白酶,植物提取物中常含有大量的丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶,还有一些含有天冬氨酸蛋白酶。为此碧云天针对不同类型样品的蛋白提取,提供了不同类型的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂混合物以供选择,具体请参考附表1。
本产品可以有效抑制细菌提取物中的各种蛋白酶活性,如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。其中AEBSF是一种水溶性的丝氨酸蛋白酶不可逆抑制剂,其抑制常数与PMSF和DFP的抑制常数相似,可以有效抑制胰蛋白酶(trypsin)、糜蛋白酶(chymotrypsin)、纤溶酶(plasmin)、激肽释放酶(kallikrein)和凝血酶(thrombin)等蛋白酶,作为PMSF和DFP的替代物,AEBSF的毒性更低、水溶性和水溶液稳定性更好。Bestatin是氨基肽酶可逆抑制剂;E64是半胱氨酸蛋白酶不可逆抑制剂;Pepstatin A是天冬氨酸蛋白酶可逆抑制剂;EDTA作为螯合剂是金属蛋白酶的可逆抑制剂。各种抑制剂的具体信息请参考附表2。
蛋白酶、磷酸酶和去乙酰化酶抑制剂混合物的比较和选择请见:https://www.beyotime.com/support/lysis-inhibitor cocktail.htm。
一个包装的本产品通常足够用于100ml裂解液的配制。
包装清单:
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
P1025-1 | 蛋白酶抑制剂混合物(细菌抽提用, 100X) | 1ml |
P1025-2 | 0.1M EDTA, pH 8.0 | 1ml |
— | 说明书 | 1份 |
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
注意事项:
本产品可以适当分装后保存,并应在临使用前添加到裂解液等适当溶液中。
本产品提供了独立包装的EDTA,可以选择性使用。例如,后续用于检测提取液中金属蛋白酶活性,则不宜添加EDTA。
本产品中含有的蛋白酶抑制剂对人体有害,请注意适当防护。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明:
1. 本蛋白酶抑制剂混合物为100X的储存液,使用时按照1:100的比例加入到裂解液中(例如,1ml裂解液中加入10μl蛋白酶抑制剂混合物),混匀后即可使用。含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配,不宜配制后冻存待后续使用。根据需要,0.1M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。待所需的抑制剂添加完毕并混匀后,就可以开始进行细菌的裂解和蛋白提取。
附表1. 碧云天提供的不同类型的蛋白提取用蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶等抑制剂混合物:
附表2. 常用蛋白酶、磷酸酶、去乙酰化酶抑制剂的具体相关信息:
名称 | 分子量 | 目标酶家族 | 抑制类型 |
AEBSF | 239.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 不可逆 |
Aprotinin | 6511.5 | 丝氨酸蛋白酶 | 可逆 |
Bestatin | 308.38 | 氨基肽酶 | 可逆 |
E64 | 357.4 | 半胱氨酸蛋白酶 | 不可逆 |
Leupeptin | 475.6 | 丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶 | 可逆 |
Pepstatin A | 685.9 | 天冬氨酸蛋白酶 | 可逆 |
EDTA | 372.24 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Phenanthroline | 198.22 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Phosphoramidon | 587.5 | 金属蛋白酶 | 可逆 |
Sodium fluoride | 41.99 | 酸性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium pyrophosphate | 221.9 | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 | 不可逆 |
β-glycerophosphate | 306.11 | 丝氨酸/苏氨酸磷酸酶 | 可逆 |
Imidazole | 68.2 | 碱性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium molybdate | 205.9 | 酸性磷酸酶 | 不可逆 |
Sodium tartrate dihydrate | 230.1 | 酸性磷酸酶 | 可逆 |
Sodium orthovanadate | 183.91 | 碱性和酪氨酸磷酸酶 | 可逆 |
(-)-p-Bromotetramisole oxalate | 373.22 | 碱性磷酸酶 | 不可逆 |
Cantharidin | 196.20 | 蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Microcystin-LR | 995.17 | 蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Calyculin A | 1009.17 | 蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A | 可逆 |
Trichostatin A | 302.37 | class I/II HDAC | 可逆 |
EX-527 | 248.71 | SIRT1 over SIRT2 & SIRT3 | 可逆 |
Nicotinamide | 122.12 | class III HDAC | 可逆 |
Sodium butyrate | 110.09 | class I/II HDAC | 可逆 |
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