SIM HF 培养基是专门培养High Five ^TM细胞的无蛋白无血清添加培养基。

SIM HF 培养基仅供实验研究、工业生产，不可用于人体及动物。

SIM HF 培养基为澄清淡黄色透明液体，2~8℃避光保存，如发现培养基变得浑浊或出现沉淀，请勿使用。

细胞培养、传代

将细胞接种到摇瓶、大培养三角瓶或生物反应器中，细胞培养体积勿超过摇瓶体积的1/3；

培养条件为27±1 ℃，摇床转速为150 rpm（不同摇床转速可能有差异，如细胞生长不好，请摸索最佳转速，刚复苏的细胞建议使用较低转速进行适应性培养）；

当细胞密度生长达到2~3×10⁶ cells/mL时，可以进行传代。

用新鲜的培养基将细胞稀释至合适密度（ 0.3-0.6×10⁶ cells/mL ），接种至合适的容器中。

细胞冻存

选择处于对数生长期的细胞，保证活率大于90%；

制备细胞冻存液：45% 新鲜培养基，45% 条件培养基， 10% 二甲基亚砜溶液（DMSO） ；

200 g离心5 分钟，弃去上清；

用细胞冻存液重悬细胞， 取样计数，调整细胞密度；

迅速分装细胞至无菌的冻存管中，每管1~2 mL，密封；

将冻存管放入程序降温盒中，-70 ℃冰箱放置过夜； 如需要长期保存，在液氮罐中保存。

细胞复苏

将冻存管迅速转移至27℃水浴中，进行融化。

将融化的细胞转至无菌的含5-10ml新鲜培养基的无菌离心管中。

200g低速离心5分钟，缓慢倒掉上部培养基，不要将沉降的细胞悬起。

用15-20ml新鲜培养基重悬细胞，确保重悬后的细胞密度为0.6×10⁶/ml左右。

将重悬的细胞放入无菌培养瓶中，旋盖拧松，放在摇床中悬浮培养。

当细胞密度生长达到2~3×10⁶/ml时，可以进行传代，传代密度为0.4-0.5×10⁶/ml。

Dong Deng, Chao Xu, Pengcheng Sun. et al. Crystal structure of the human glucose transporter GLUT1. Nature. 2014 May 18. doi: 10.1038/nature13306.