MiPure Cell/Tissue miRNA Kit

 

 

• miRNA提取效率高，起始量范围广

• 大分子RNA及基因组DNA残留更少

• 操作简便，兼容性强

 

miRNA提取效率高，起始量范围广

使用MiPure Cell/Tissue miRNA Kit与total RNA提取试剂（如TRIzol）分别提取相同起始量的5×10⁶ HEK293细胞或20 mg小鼠肝脏组织的miRNA和total RNA，使用相同体积RNase-Free水洗脱/溶解产物，琼脂糖凝胶电泳检测相同量产物结果如下图所示。对于细胞或小鼠组织，MiPure Cell/Tissue miRNA Kit提取得到的产物不含有大分子RNA如18S、28S RNA，且核糖体RNA含量少于total RNA。通过Vazyme# MR101 (miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop))进行逆转录和Vazyme# MQ101 (miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix)进行qPCR检测相同量产物的miR-16基因结果显示，MiPure Cell/Tissue miRNA Kit对于小片段RNA（包含miRNA）的提取产量显著高于TRIzol提取的total RNA。

                     HEK293 Cell                                                  Mouse liver

 

使用10²-10⁶数量十倍梯度稀释的293细胞作为起始样本提取miRNA后检测U6 snRNA丰度如下图所示，5个10倍梯度稀释的样品提取产物显示极好的丰度及线性关系。

 

 

大分子RNA及基因组DNA残留更少

使用10 mg小鼠肝脏提取得到的高产量miRNA使用Oligo dT作为引物进行常规逆转录，并检测Actb基因（mRNA长度约1800 nt）表达残留。与Vender T与Vender Q同类产品比较，MiPure Cell/Tissue miRNA Kit提取小鼠组织得到的等量产物中mRNA残留更低。使用10⁶个HEK293细胞提取得到的高产量miRNA产物直接进行针对GAPDH 3’-UTR区设计的极短产物PCR检测基因组残留，MiPure Cell/Tissue miRNA Kit产物的gDNA残留明显低于使用vender Q提取的等量产物。

 

                        小鼠肝的miRNA的mRNA残留                                      293细胞的miRNA的gDNA残留

 

 

 

操作简便，兼容性强

MiPure Cell/Tissue miRNA Kit提取组织/细胞miRNA流程与vender T和vender Q相应产品完全一致，结合高效的RNA Isolater抽提试剂和硅胶柱纯化技术，整个过程不超过1小时。其中裂解液RNA Isolater与基于酚与异硫氰酸胍的商业化RNA提取试剂可兼容互换。

 

广泛的下游应用适用性

使用Vazyme 组织/细胞miRNA提取分离试剂盒提取得到的miRNA可用于常规qPCR、northern、micro-array等实验，同时更适用于小分子miRNA的建库实验及外泌体小RNA提取。对比相同起始量细胞/组织的total RNA，具有建库产物总量更高、mRNA及核糖体RNA干扰更少等优点。

以20 mg小鼠肝脏组织为对象分别使用MiPure Cell/Tissue miRNA Kit分离miRNA或使用TRIzol试剂提取total RNA，等体积洗脱或溶解RNA产物。得到的小分子RNA（约250-300ng/μl）及total RNA（约1.5 μg/μl）等体积起始建库。建库产物通过2100毛细管电泳检测如右图所示。

 

 

           miRNA样品建库产物2100电泳图                               total RNA 样品建库产物2100电泳图

 

 

MiPure Cell/Tissue miRNA Kit是基于硅胶柱吸附法开发的miRNA提取分离试剂盒，能有效提取长度20-200nt的小片段RNA，包括miRNA、siRNA等。高效的裂解液能轻松裂解各种动物组织和细胞，减少蛋白和杂质对产物的干扰，优化的硅胶吸附填料高效去除基因组DNA和大分子RNA，保证产物的高产量和高质量。试剂盒适合于从<5x 10⁶真核培养细胞，<100 mg动物组织提取小分子RNA，得到的小分子RNA可直接用于芯片分析，Northern杂交，RT-PCR等。试剂盒也可用于提取总RNA，满足客户的不同需求。