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高敏型ECL化学发光检测试剂盒(即用型)
 | 图1. 不同品牌的ECL试剂进行Western检测结果本实验设置了4个不同浓度梯度的蛋白质，Vazyme的高敏型ECL化学发光试剂的 检测灵敏度、发光强度、持久性均显著优于竞品试剂。 |
 | 图2. 不同品牌的ECL试剂进行Western检测结果 由于T公司和B公司的试剂检测灵敏度比较低，本实验设置了3个不同浓度梯度的蛋白质，Vazyme的高敏型ECL化学发光试剂的检测灵敏度、发光强度、持久性均显著优于竞品试剂，而且B公司极超敏试剂的背景值很高，影响观察结果。 |
本试剂盒以化学发光方法检测蛋白质或核酸类生物大分子。蛋白质或核酸类生物大分子在电泳后转移到印迹膜上，用一抗和辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP)标记的二抗结合膜上的目的蛋白；或以HRP标记的探针直接或间接结合膜上的核酸。洗膜后用新鲜配制的ECL工作液，在室温下避光孵育膜2-3 min，将印迹膜用保鲜膜包被粘贴固定于X光片曝光暗盒，然后转入暗室将X光胶片压在膜上曝光时长由数秒到数小时。显影定影后蛋白质或核酸条带可清晰显示在X光胶片上，也可不进行X光胶片曝光直接对印迹膜进行CCD扫描。
本试剂盒采用了独特的发光底物系统，有效降低曝光背景、提高检测灵敏度并在检测持久性和信噪比方面与本公司的ECL增强型发光试剂盒（Vazyme #E411）相比有显著改善。
注意事项
1. ECL工作液配制过程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液时务必更换吸头，工作液新鲜配制后应立即使用，室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
2. 各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。Peroxide Solution B液含有氧化剂，易被还原而失效。
3. ECL发光液是HRP的显色底物，因此检测系统最终必须基于HRP酶标记抗体或者核酸探针。
4. 尽量避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。
5. 应使用高质量保鲜膜。质量较差的保鲜膜可能会淬灭荧光或由于含有杂质而污染印迹膜造成曝光背景值偏高。
6. 根据目的蛋白丰度不同，曝光时间可能是数秒至数小时。曝光时间不足会导致目的条带不明确，曝光时间过长会使背景加深。
7. 叠氮化钠（NaN3 ）能抑制HRP活性，若回收HRP标记探针或者抗体应避免使用NaN3 ，如必需使用勿超过0.01%。
8. 由于发光液极其灵敏，推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000-1:4000，二抗1:2000-1:5000。抗体浓度过高可能造成高背景或没有条带。
9. ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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