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CCK-8 Cell Counting Kit
WST-8是MTT的一种升级替代产品，相比于MTT或其他类似产品，WST-8有如下优点：
1. 省去特定溶剂溶解的步骤：MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的甲臜（Formazan）是不溶于水的，需要特定的溶剂进行溶解，而由WST-8与脱氢酶还原生成的甲臜产物是水溶性的。
2. WST-8的线性范围更宽泛，灵敏度更高，稳定性更好。
产品特点
1.操作简便：即开即用，无需配制其他试剂
2.灵敏度高：灵敏度、线性相关性高，重复性好
以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，进行CCK-8、WST-1、MTT法比较，实验结果表明CCK-8法灵敏度高，线性范围宽。
以HEK293悬浮细胞为样本铺96孔板，单组三个复孔设9个细胞数梯度，每组细胞数分别为：0、400、800、1600、3200、6400、12800、25600、51200/孔，以细胞数量对吸光值绘制标准曲线，与其他公司同类产品相比，CCK-8 Solution相关性为R2 > 0.99。
3.对细胞毒性极低：CCK-8 Solution检测结束，弃去含有CCK-8的细胞上清，加入新鲜的培养液，细胞可继续培养。
CCK-8 Cell Counting Kit，简称CCK-8试剂盒，是依赖于WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8在电子耦合载体1-Methoxy PMS的作用下可被线粒体内的一些脱氢酶还原成高度水溶性的橙黄色甲臜产物(Formazan)，生成的甲臜的颜色深浅与细胞增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450 nm 波长处测得吸光值，该测定值可间接反映活细胞的数量。本试剂盒的CCK-8 Solution 为即用型试剂，可直接加入到细胞样品中，孵育一定时间后即可检测，不需要预配各种成分。
注意事项
1. 本试剂为皮粉色液体，使用时需避光操作。
2. 首次实验时，建议先设定几个孔摸索接种细胞的数量以及加入CCK-8 Solution的孵育时间（一般孵育的时间为1~4 h）。
3. 细胞接种至96孔细胞板中务必避免产生气泡。
4. 本试剂盒的检测是依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂（如抗氧化剂）会干扰检测，请先设法去除还原剂干扰再进行CCK-8 Solution的检测。
5. 进行药物抑制实验时，如果药物中含有金属，如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金属会对CCK-8 Solution的显色反应产生影响，从而导致检测的灵敏度降低。
6. 当测定细胞数量时，为保证单次实验结果的稳定性和重复性，建议每次同时做标准曲线。
常见问题及解决方案
1. 接种至96孔细胞板中的细胞数量应该是多少？
答：贴壁细胞至少1000个/孔(100 μl 培养基)，白细胞至少2500个/孔(100 μl 培养基)。建议实验前设定几个不同细胞数量的孔进行条件摸索。
2. CCK-8 Solution对细胞有毒性吗？
答：CCK-8 Solution本身是对细胞毒性很低，不会影响细胞的生长。因此，经过CCK-8 Solution处理的细胞可以弃去上清后再加入细胞培养液继续培养。
3. 待测药物本身具有氧化性或还原性时，如何进行操作？
答：如果待测药物本身具有氧化性或还原性，可在加入CCK-8 Solution之前更换新鲜的培养基，以去除待测药物的影响。当待测药物影响比较小时，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入待测药物后的空白吸收即可。
4.实验过程中可以加入CCK-8 Solution隔夜后第二天检测吗？
答：一般情况下，建议加入CCK-8 Solution后，37℃孵育2 h后检测。如果时间来不及可以向每孔加入1% SDS溶液，室温避光保存，24 h内检测，吸光度不会受到影响。(加入1% SDS溶液的体积与加入CCK-8 Solution的体积相同)。
5. 实验过程中，处理细胞用的不是96孔板，如何确定加入CCK-8 Solution的体积？
答：CCK-8 Solution的加入量是细胞板中每孔的培养基体积的10%。按照该比例进行换算即可。如果是使用384孔板进行细胞增殖与活性的检测，建议先将CCK-8 Solution用ddH2O稀释1倍后，加入细胞板中每孔培养基的20%即可。
6. 如果测得的吸光值很低，如何解决？
答：(1)增加细胞数量；(2)延长加入CCK-8 Solution后孵育的时间。
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