Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2

 

●  Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase提供突变率最低的高保真PCR

●  Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase卓越的长片段扩增能力，广泛适用于20 kb以内任何质粒的扩增

●  扩增以指数方式进行，模板使用量极低，有利于原始甲基化模板的彻底降解

●  ClonExpress^®快速克隆系统高效环化PCR产物

●  DpnI消除原始模板污染

●  可一步实现目标质粒上三至五个不连续位点(相距超过50 bp)的定点突变

 

      Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2是Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit的升级版本。扩增模块由Phanta^® Super-Fidelity DNA Polymerase升级为Phanta^® Max Super-Fidelity DNA Polymerase，扩增能力更强、模板兼容性更广且高GC片段扩增成功率显著提高。此外，试剂盒优化了引物设计方式：由“每对正反向引物5’端包含至少20 bp反向互补区域”修改为“每对正反向引物5’端包含15-21 bp反向互补区域(GC含量40% - 60%为佳)，各引物待突变位点至3’端区域Tm值高于60℃为佳”。高度优化的反应缓冲液、快捷的操作流程以及更高的定点突变成功率，使得Mut Express^® MultiS Fast Mutagenesis Kit V2成为DNA多点突变首选试剂盒。

 

突变位点设计

 

实验流程图

 

 

 

 

 

 

 

图2. 使用Mut Express^® MultiS进行不连续三点突变实验流程。
以待突变位点A、B、C为界，将质粒分为AB、BC和CA三段。在每个待突变位点处设计部分反向互补的引物。以原始质粒为模板，分别扩增AB段(A Forward Primer 和B Reverse Primer)、BC段(B Forward Primer 和C Reverse Primer)和CA段(C Forward Primer 和A Reverse Primer) (I)。扩增产物经DpnI消化(I)后，进行重组环化(II)。重组产物直接进行转化即可完成定点突变(III)。