T7 RNAi Transcription Kit
图1. 500 bp dsRNA 2%琼脂糖凝胶电泳图
1:DL2000 Plus DNA Marker;
2和4:500 bp dsRNA酶解前后产物(双端转);
3和5: 500 bp dsRNA酶解前后产物(混合转)。
图2. siRNA 12% PAGE电泳检测结果
1: siRNA转录产物;
2: siRNA转录双酶消化产物;
3: 单链模板
4: 双链退火模板
图3. siRNA干扰绿色荧光蛋白表达。
左图为GFP质粒与negative control GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞;右图为GFP质粒和positive GFP siRNA共转染24 h后的293T细胞。
T7 RNA ploymerase可识别带有T7启动子的DNA模版,以四种NTP为底物,体外转录合成RNA。T7 RNAi Transcription Kit是在T7 High Yield RNA Transcription Kit基础上为转录双链RNA而设计优化的版本,可用于转录21 bp的siRNA和长片段的dsRNA。转录产物经纯化后可用于阳离子脂质体、磷酸钙共沉淀、电穿孔、DEAE-葡聚糖及显微注射等方法介导的RNAi实验。一般情况下,一个反应可产生20-80 µg的RNA。
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