HiScript® II One Step RT-PCR Kit
高产量一步法RT-PCR
• 逆转录和PCR在同一管内进行
• 检测灵敏度可达0.1 pg总RNA
• 可扩增超过10 kb的长片段
图1. A. 以Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增555 bp GAPDH片段。检测灵敏度可达到0.1 pg。
B. 以猪蓝耳病毒PRRSV RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增660 bp片段。检测灵敏度可达到0.2 TCLD50。
C. 以1 μg Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611)扩增不同长度的片段。可成功扩增长达12.1 kb的UTRN片段。
HiScript® II One Step RT-PCR Kit专为以RNA为模板 (如RNA病毒)的终点法PCR检测而设计。使用基因特异引物 (GSP),逆转录和PCR反应在一管内完成,不需要额外的开管/移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。整合HiScript® II Reverse Transcriptase以及Champagne TaqTM DNA Polymerase的优越性能,配合经过优化的缓冲体系,HiScript® II One Step RT-PCR Kit的检测灵敏度可达到0.1 pg总RNA,并可扩增长达10 kb的片段。试剂盒以便捷的Master Mix形式提供。
组分说明:
组分 | P611-01 50 rxn (50 ul/rxn) |
RNase free ddH2O | 1 ml×2 |
2×One Step Mixa | 625 μl×2 |
One Step Enzyme Mixb | 125 μl |
10 ×Loading buffer | 1.25 ml |
a. 包含dNTP和缓冲体系
b. 包含HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor以及Champagne TaqTM plus DNA Polymerase
贮藏条件: -20℃。
质量控制:
所有组分经检测均无核酸外切酶,核酸内切酶,RNase残留。
功能检测1:以1 μg HeLa 细胞总RNA为模板,扩增FIB基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见10 kb目的条带。
功能检测2:以1 pg HeLa 细胞总RNA为模板,扩增GAPDH基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的550 bp条带。
注意事项:
1. 防止RNase污染,请保持实验区域洁净;操作时需要戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。
2. 超过3 kb的产物扩增前需要进行65℃ 2 min的退火处理以获得全长cDNA用于扩增。
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