miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)
茎环法miRNA cDNA一链合成试剂盒
优秀的线性关系
以小鼠肝脏组织Total RNA 的10 倍稀释梯度(10 pg-1 μg)为模板,使用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (# MR101)进行逆转录,得到的cDNA使用miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix (# MQ101)扩增mmu-miR-16基因可以看到,在宽广的模板区间内,该配套产品具有优秀的线性关系。
优越的反应体系
以Hela 细胞Total RNA为模板逆转录,扩增hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200基因;以小鼠肝脏组织Total RNA样本进行逆转录,扩增mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21基因。结果显示,与同类产品相比,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (# MR101)配套miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix (# MQ101)的反应体系,均有优异的表现。
简便的引物设计
提供配套的引物设计软件,界面友好,操作简便,只需要在对话框中输入microRNA 序列,点击设计引物即可轻松得到逆转录茎环引物和qPCR引物,也可点击导出,生成Excel文件。(点此可进入引物设计下载界面)
miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)是适用于茎环法miRNA cDNA一链合成的专用试剂盒,含基因组DNA去除步骤,可以在42℃ 2 min条件下快速去除基因组DNA的污染,保证后续结果更加可靠。Kit基于的HiScript® II Reverse Transcriptase具有极高的热稳定性,配以针对优化的缓冲体系,均有利于miRNA特异性逆转录产物的生成。cDNA产物后续定量,推荐使用本公司的miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix (Vazyme # MQ101),以获得最优的实验结果。
组分 | MR101-01 50 rxn (20 μl/rxn) | MR101-02 100rxn (20 μl/rxn) |
RNase-free ddH2O | 1 ml | 1 ml |
5 × gDNA Wiper Mix | 100 μl | 200 μl |
10 × RT Mix a | 100 μl | 200 μl |
HiScript II Enzyme Mix b | 100 μl | 200 μl |
a.包含dNTP
b.包含RNase inhibitor
注意事项
1. 防止RNase污染
保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。
2. 5 ×gDNA Wiper Mix的使用
5 ×gDNA Wiper Mix含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液器轻轻吹打混匀。不应使枪头插入液面过深,否则会因枪头壁的粘附造成酶量的损失。
3. 反应液的配制请在冰上操作完成
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