HiScript® II Q Select RT SuperMix for qPCR(+gDNA wiper)
可灵活选择逆转录引物的两步法RT-qPCR首选预混液(包含基因组去除模块)
• 基于高效的HiScript® II Reverse Transcriptase
• 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物
• 即用型SuperMix预混液使用方便省时
• gDNA wiper Mix可迅速彻底去除基因组污染
HiScript® 两步法Select RT-qPCR预混液(含gDNA去除模块)以极高性价比的HiScript® II Reverse Transcriptase为基础,针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物,满足多样化的用户需求,用户可根据逆转录后续实验需要选择Oligo (dT)23VN/Random Hexamers或基因特异性引物(GSP)。产品中的4 × gDNA wiper可在逆转录步骤前快速彻底去除基因组污染,提高实验结果的可信度。
本产品操作简便,降低操作过程中的污染机率。合成的cDNA可以用于SYBR® Green qPCR分析法和探针分析法,可以根据实验目的与AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q111)、ChamQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q311)和AceQ® qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 等定量试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。
图1. 实验流程图
表1. HiScript® II 两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒选择指南。
组分说明:
组分 | R233-01 100 rxn (20 μl/rxn) |
RNase free ddH2O | 2×1 ml |
4 × gDNA wiper Mix | 400 μl |
5 × HiScript® II Select qRT SuperMix II a | 400 μl |
Oligo (dT)23 VN (10 μM) | 100 μl |
Random hexamers (50 ng/μl) | 100 μl |
5 ×Select No RT Control Mix b | 40 μl |
a. 包含Buffer、dNTP Mix、HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor。
注意:与HiScript® II Q Select RT SuperMix for qPCR (R232-01)中所带的5 ×HiScript® II Q Select qRT SuperMix成分不同,不可以混用。
b. 除不含HiScript® II Reverse Transcriptase外,其余成分与5 × HiScript® II Select qRT SuperMix II相同,用于配制No RT对照反应。
贮藏条件:-20℃。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。
功能检测:以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板,qRT-PCR检测高中低三种丰度共七个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对CT值做标准曲线并计算扩增效率,R2>0.990,扩增效率在0.95到1.05之间。在1 µg HeLa 细胞总RNA中混入100 ng human genomic DNA,经gDNA wiper Mix处理后,进行两对质控引物的qRT-PCR,No RT Control的CT值>40。
注意事项
1. 4 × gDNA wiper Mix、5 × HiScript® II Select qRT SuperMix II 及5 × Select No RT Control Mix 含有高浓度的甘油,在使用前请短暂离心收集到反应管底部,并用移液枪轻轻反复吸打充分混匀后,准确吸取。
2. 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的总RNA。如果目的基因表达量非常低,最多加入5 µg total RNA,否则加入RNA量过高,可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3. 如果加入RNA模板体积较大(如超过2 µl),请确保RNA是溶于水中而不是TE中,因为TE中的EDTA会对gDNA去除以及逆转录反应产生抑制。
4. 可以不经过基因组去除步骤,直接用5 × HiScript® II Select qRT SuperMix II 进行逆转录,这样所得到的结果会与使用HiScript® Q II Select RT SuperMix for qPCR (Vazyme #R232-01)相当。但是,请勿将4 × gDNA wiper Mix与R232-01配套使用,因为R232-01中所带的5 × HiScript® II Select qRT SuperMix 不含终止gDNA wiper 反应的成分,有可能会影响后续的qPCR结果。
5. cDNA产物仅适用于qPCR反应,不适用于用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要,可使用HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Vazyme # R211)、HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)(Vazyme #R212或HiScript® 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Vazyme #R111)进行操作。
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