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HiScript® II Q Select RT SuperMix for qPCR
可灵活选择逆转录引物的两步法RT-qPCR首选预混液
• 基于高效的HiScript® II Reverse Transcriptase
• 针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物
• 即用型的SuperMix预混液使用省时方便
HiScript® 两步法Select RT-qPCR预混液以高性价比的HiScript® II Reverse Transcriptase为基础，使用设计独特的Oligo (dT)23VN引物，提高了反应特异性及灵敏度，获得质量更好的cDNA。针对不同实验设计可灵活使用不同类型的逆转录引物，满足多样化的用户需求，用户可根据逆转录后续实验需要选择Oligo (dT)23VN primer/Random Hexamers或基因特异性引物（GSP）。同时对反应体系进行大幅简化，5 ×qRT SuperMix 含有反转录反应除引物以外所需的全部试剂且在-20℃不会冻结，使用方便。
本产品操作简便，降低操作过程中的污染机率。合成的cDNA可以用于SYBR® Green qPCR分析法和探针分析法，可以根据实验目的与AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme#Q111)、ChamQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme#Q311)和AceQ® qPCR Probe Master Mix (Vazyme#Q112) 等定量试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
图1. 实验流程图
表1. HiScript® II 两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒选择指南。
组分说明：
| 组分 | R232-01 100 rxn (20 μl/rxn) |
| RNase free ddH2O | 2×1 ml |
| 4 ×gDNA wiper Mix | 400 μl |
| 5 ×HiScript® II Select qRT SuperMix IIa | 400 μl |
| Oligo (dT)23 VN (10 μM) | 100 μl |
| Random hexamers (50 ng/μl) | 100 μl |
| 5 ×Select No RT Control Mixb | 40 μl |
a. 包含Buffer、dNTP Mix、HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor。
注意：与HiScript® II Q Select RT SuperMix for qPCR (R232-01)中所带的5 ×HiScript® II Q Select qRT SuperMix成分不同，不可以混用。
b. 除不含HiScript® II Reverse Transcriptase外，其余成分与5 ×HiScript® II Select qRT SuperMix II相同，用于配制No RT对照反应。
贮藏条件：-20℃。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。
功能检测：以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板，qRT-PCR检测高中低三种丰度共七个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对CT值做标准曲线并计算扩增效率，R2>0.990，扩增效率在0.95到1.05之间。
1. 5 ×HiScript® II Select qRT SuperMix 及5 ×Select No RT Control Mix 含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻反复吸打充分混匀后，准确吸取。
2. 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的总RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高，可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3. 如果加入RNA模板体积较大(如超过2 µl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。
4. 如果在qPCR实验中发现No RT Control的Ct值与实验组相差<5，则说明RNA模板有可能受到基因组DNA的污染。此时，可选择HiScript® II Q Select RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme#R233-01)，以彻底消除基因组DNA的背景。
5. cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要，可使用HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Vazyme #R211)进行操作。
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