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HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)
预混液形式的两步法RT-PCR/qPCR首选试剂（包含基因组去除模块）
• 基于高效的HiScript® II Reverse Transcriptase
• 高稳定性：推荐反应温度42-55℃
• Anchored Oligo (dT)23VN设计独特，确保反应特异性，提高第一链cDNA合成效率和成功率
• 即用型的SuperMix预混液使用方便省时
• gDNA wiper Mix可迅速彻底去除基因组污染
图1. HiScript® II 两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒组分
图2. 实验流程图
表1. HiScript® II 两步法RT-PCR/qPCR系列试剂盒选择指南
HiScript® II两步法qPCR试剂盒以高性价比的HiScript® II Reverse Transcriptase为基础，使用设计独特的Oligo (dT)23VN引物，提高了反应特异性及灵敏度，获得质量更好的cDNA。同时对反应体系进行大幅简化，即用型的SuperMix将合成高质量第一链cDNA所需的所有成分合并为一管5 × SuperMix，只需加入RNA和水即可进行逆转录反应，RNA体积最多可加至反应总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应，且SuperMix在-20℃不会冻结，使用方便。产品中的4 × gDNA wiper可在逆转录步骤前快速彻底去除基因组污染，提高实验结果的可信度。
本产品操作简便，降低操作过程中的污染机率。合成的cDNA可以用于SYBR® Green qPCR分析法和探针分析法，可以根据实验目的与AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q111)、ChamQ® qPCR SYBR® Green Master Mix(Vazyme #Q311)和AceQ® qPCR Probe Master Mix (Vazyme #Q112) 等定量试剂配合使用，进行高性能的基因表达分析。
组分说明：
| 组分 | R223-01 100 rxn (20 μl/rxn) |
| RNase free ddH2O | 2×1 ml |
| 4 × gDNA wiper Mix | 400 μl |
| 5 × HiScript® II qRT SuperMix II a | 400 μl |
| 5 × No RT Control Mix b | 40 μl |
a. 包含Buffer、dNTP、HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)23VN primer mix。
注意：与HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (R222-01)中所带的5 ×HiScript® II qRT SuperMix成分不同，不可以混用。
b. 除不含HiScript® II Reverse Transcriptase外，其余成分与5 ×HiScript® II qRT SuperMix II相同，用于配制No RT对照反应，排除基因组残留。
贮藏条件：-20℃。
质量控制
所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。
功能检测：以1 pg-1 µg HeLa 细胞总RNA为模板，qRT-PCR检测高中低三种丰度共七个基因表达。以4-6个数量级的模板量的对数值对CT值做标准曲线并计算扩增效率，R2>0.990，扩增效率在0.95到1.05之间。在1 µg HeLa细胞总RNA中混入100 ng human genomic DNA，经gDNA wiper Mix处理后，进行qRT-PCR，No RT Control的CT值>40。
注意事项
1. 4 × gDNA wiper Mix、5 × HiScript® II qRT SuperMix II及5 × No RT Control Mix含有高浓度的甘油，在使用前请短暂离心收集到反应管底部，并用移液枪轻轻吸打充分混匀后，准确吸取。
2. 20 µl逆转录反应体系建议加入不超过1 µg的总RNA。如果目的基因表达量非常低，最多加入5 µg total RNA，否则加入RNA量过高，可能会超出后续定量PCR的线性范围。
3. 如果加入RNA模板体积较大(如超过2 µl)，请确保RNA是溶于水中而不是TE中，因为TE中的EDTA会对逆转录反应产生抑制。
4. cDNA产物仅适用于qPCR反应，不适用于用于克隆等下游实验的长片段PCR扩增。如有需要，可使用HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit(Vazyme #R211)、HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)（Vazyme #R212或HiScript® 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Vazyme #R111)进行操作。
5. 可以不经过基因组去除步骤，直接用5 ×HiScript® II qRT SuperMix II进行逆转录，这样所得到的结果会与使用HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (R222-01)相当。但是，请勿将4 ×gDNA wiper Mix与R222-01配套使用，因为R222-01中所带的5 ×HiScript® II qRTSuperMix不含终止gDNA wiper反应的成分，有可能会影响后续的qPCR结果。
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