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M-MLV (H-) Reverse Transcriptase
稳定可靠的逆转录酶
• 点突变消除RNase H活性以获得长的cDNA产物
• 对于100 ng以上的RNA模板具有稳定可靠的逆转录表现
• 合成片段≤5 kb
• 可用于5’-RACE反应以及cDNA文库构建等实验
野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus)具有以下几种活性：依赖于RNA的DNA聚合酶活性；依赖于DNA的DNA聚合酶活性；RNase H活性。由于RNase H活性能够催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因此在cDNA第一条链的合成反应中可能会降解模板RNA。M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通过定点突变得到的RNase H活性缺失的M-MLV突变体。与常见的通过删除(deletion) RNase H结构域方法得到的突变体相比，本产品保留了完整的蛋白结构，因此具有与野生型相同的聚合酶活性，可用于较长的cDNA合成以及全长cDNA文库的构建等。
组分说明：
| R021-01 | 10000 U |
| 5×RT Buffer | 500 μl |
| M-MLV(H-) Reverse Transcriptase (200U/μl) | 50 μl |
贮藏条件: -20℃保存。
质量控制：
核酸外切酶残留检测：2000 U的本酶和50 μM 3’和5’突出退火双链产物在37℃下孵育16 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：2000 U的本酶和0.3 μg质粒A在37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测：2000 U的本酶和1 μg HeLa细胞总RNA在37℃下孵育30 min，RNA电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌DNA残留检测：200 U本品中残留的核酸经E.coli gDNA特异性的TaqMan探针qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。
功能检测：逆转录体系中加入200 U本酶，以1 μg Hela细胞总RNA为模板，Oligo (dT)18为引物，42℃反应45 min。取1/10 cDNA产物进行PCR扩增VIN基因。琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的4.6 kb条带。
注意事项：
请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
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