• 产品组分

•  贮藏与保质期：

本产品应置于-20℃储存，有效期一年;使用过程中请尽量避免反复冻融。如每次使用量较少，推荐小份分装使用。

1. 扩增曲线形状异常

a. 扩增曲线不光滑：信号太弱，经系统矫正后产生，提高模板浓度重复试验；ROX类型使用错误，确认所用ROX与机型是否匹配。

b. 扩增曲线断裂或下滑：模板浓度较高，基线的终点值大于Ct值。减小基线终点(Ct值-4)，重新分析数据。

c. 个别扩增曲线突然骤降：反应管内留有气泡，由于温度升高后气泡破裂，使仪器检测到的荧光值突然降低所致。处理样本时要注意离心、进行扩增反应之

前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

2. 反应结束无扩增曲线出现

a. 反应循环数不够：一般设置循环数为45，但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号，降低数据可信度。

b. 确认程序中是否设置了信号采集步骤：两部法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段；三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

c. 确认探针/引物是否降解：长时间未用的探针/引物应先通过PAGE电泳检测完整性，以排除其降解的可能性。

d. 模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

e. 模板降解：重新制备模板，重复试验。

3. Ct值出现太晚

a. 扩增效率极低：优化反应条件，尝试三步法扩增程序，或者重新设计引物探针

b. 模板浓度太低：减少稀释度重复试验，一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

c. 模板降解：重新制备模板，重复试验。

d. PCR产物太长：推荐将PCR产物长度设计为80 bp-200 bp之内。

e. 反应体系中存在PCR反应抑制剂：一般为加入模板时带入，加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。

4. 阴性对照也出现明显扩增

a. 反应体系或者水被污染：更换新的Mix或者水重复试验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

b. 非特异性扩增的出现：一般在40循环以后阴性对照出现扩增属正常情况。

5. 绝对定量时标准曲线线性关系不佳

a. 加样误差：加大模板稀释倍数，提高加样体积。

b. 标准品降解：重新制备标准品，重复试验。

c. 模板浓度太高：增加模板稀释倍数。

6. 实验重复性差

a. 加样体积失准：使用性能较好的移液枪，扩大反应体积，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中。

b. 定量PCR仪不同位置温度控制不一致：定期校准仪器。

c. 模板浓度太低：模板浓度越稀，重复性越差，减少模板稀释度活提高加样体积。

7. 本产品是否可以4℃储存

a. 不可以。4℃保存将会导致产品活性下降。

b. 该产品-20℃保存可以长期保持活性，推荐-20℃保存。