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Taq DNA Polymerase (Mg2+ Plus Buffer) 10000U

价:
1400.00
价:
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号:P101-03

牌:Vazyme 诺唯赞

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用于常规的PCR实验

Taq DNA Polymerase (Mg2+  Plus Buffer)

 

优化的缓冲体系,便于快速得到理想的扩增结果

提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤

 

      本产品由克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到,不含核酸内切酶、核酸外切酶以及细菌DNA。Taq DNA Polymerase具有5’→ 3’聚合酶活性和5’→ 3’外切酶活性,但无3’→ 5’外切酶活性。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体,并适用于ClonExpress® 快速克隆试剂盒 (C112/C113/C114)。

贮藏与保质期:-20 ℃保存。

操作注意事项:

由于Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性, PCR反应体系请在冰上进行配制,之后再置于PCR仪上进行反应。这样可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,有助于得到高特异性的扩增结果。

 

常见问题及解决方案:

(1) 不出现扩增条带

a)、引物设计有误:核对引物设计方案。

b)、扩增体系配制错误:重复实验。

c)、扩增反应条件不优化:调整Mg2+浓度、酶量、扩增程序。

d)、模板质粒质量偏差:长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的质粒作为模板。

e)、模板的GC含量:GC含量过高会导致DNA的双链无法完全打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021)可以有效降低解链温度;GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过TD PCR摸索合适的反应条件。

(2)出现非特异性扩增带

a)、引物设计不够优化:引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。

b)、模板不纯:模板被污染,需重新制备模板。

c)、试验条件不够优化:如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度、降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数;另外,可降低Mg2+及酶的浓度。

(3)条带弥散或拖尾

a)、模板降解或过量:可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板,对于简单模板(例如质粒、λDNA),每50ul反应使用1pg-10ng DNA;对于复杂模板(例如基因组、cDNA),每50ul反应使用1ng-1ug DNA。

b)、酶量加太多:如高保真系列:50ul反应体系加1U,Taq系列:50ul体系加2U。

(4)条带很暗

a)、增加模板量,提高循环数。

b)、多扩几管,胶回收浓缩。

(5) 产物有错配

a)、检查原始模板是否原本就是突变或错配的。

b)、少量序列存在非严谨序列,有相似重组序列,导致重组错位。

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