提供最高的保真度和最强的扩增能力
Phanta® Super-Fidelity DNA Polymerase
• 保真度是Taq DNA Polymerase的52倍,是Pfu DNA Polymerase的6倍
• 扩增速度是常规聚合酶的4-150倍
• 广泛的模板适应性
• 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板,便于快速得到理想的扩增结果
• 提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤
图1. 使用Phanta® Super-Fidelity DNA Polymerase以λ DNA为模板扩增长度分别为200 bp、600 bp、800 bp、1 kb、1.2 kb、2.0 kb的目标片段,延伸时间设置为1秒。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。
图2. 使用Phanta® Super-Fidelity DNA Polymerase以λ DNA为模板扩增长度分别为5 kb、8 kb、10 kb、12 kb、15 kb的目标片段,延伸时间设置为3分钟。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。
图3. 使用LacI法测定, Phanta保真性是普通Taq DNA聚合酶的52倍, 是野生型Pfu DNA聚合酶的6倍。
(Cline et al. , Nucleic Acids Research, 24: 3546-3551(1996))
Phanta® Super-Fidelity DNA Polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代超保真DNA聚合酶,具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性,可用于几乎所有PCR反应。经过改造,Phanta® Super-Fidelity DNA Polymerase的行进性(processivity)得到了大幅度提升,即使是非常复杂的模板,也能准确快速的完成反应,且其扩增速度可以达到15秒/kb。5 × Phanta SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1 × 终浓度为2 mM),可以使用随酶提供的MgSO4对反应体系进行优化。
常见问题及解决方案
引物设计注意事项
1.引物3’端最后一个碱基选择C或G;
2.引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;
3.引物3’端尽量避免出现发夹结构;
4.引物Tm值控制在55℃-65℃之间;
5.引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
6.引物GC含量控制在40%-60%之间;
7.正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。
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