缺失3’→5’外切酶活性的Klenow片段
DNA Polymerase I Klenow Fragment exo-
● 3’末端加dA尾
● 用随机引物制备探针
● 随机引物法标记
Klenow片段(3´→5´exo-) 是DNA聚合酶I的N末端截短物,它保留了DNA聚合酶活性,但失去了5´→3´核酸外切酶活性;该酶经突变 (D355A,E357A) 进一步去除了其3´→5´核酸外切酶活性。
贮存缓冲液
25 mM Tris-HCl pH 7.4, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 50% glycerol
反应缓冲液 (10 × Blue Buffer)
100 mM Tris-HCl pH 7.9, 500 mM NaCl, 100 mM MgCl2, 10 mM DTT
来源
克隆有来自E.coli DNA Polymerase I Klenow Fragment exo-基因的重组E. coli菌株。
单位定义
37℃、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位 (U)。
组分 | N105-01 5,000 U |
Klenow Fragment exo- (5 U/μl) | 1 ml |
10 × Blue Buffer | 2 ml |
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