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去除核糖体rRNA，适合lncRNA分析
VAHTSTM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina®
● 包含Ribo-OffTM rRNA depletion module， 可去除人、小鼠、大鼠、牛、狗、马、鸡、猴、猪、斑马鱼等物种的核糖体RNA
● 链特异性建库
● 优化的大片段建库方案
图1. Ribo-OffTM模块去除rRNA原理示意图。
图2. 使用Ribo-OffTM模块去除rRNA总共耗时不超过2小时，其中操作时间仅需10分钟以内。
图3. 1 μg universal human reference RNA分别用Oligo dT磁珠纯化mRNA或者用Ribo-OffTM模块去除rRNA后构建文库，用Hiseq 2500测序。数据与人类基因组数据库hg19进行比对。可以看到， Ribo-OffTM模块可以更有效地去除rRNA，并可保留更多的非编码RNA信息。
VAHTSTM Total RNA-seq (H/M/R) Library Prep Kit for Illumina®适用于起始模板为0.1-1 μg的人、小鼠、 大鼠总RNA的链特异性转录组文库构建。与常规mRNA-seq文库构建不同的是，本试剂盒将rRNA (包括细胞质28S, 18S, 5S rRNA以及线粒体12S, 5.8S rRNA)从总RNA中去除，保留mRNA以及其它非编码RNA，可用于lncRNA等非编码RNA的分析。降解的RNA样本也可用本试剂盒进行文库构建。 在第二链cDNA合成时，掺入dUTP标记第二链； PCR前将标记的第二链模板用UDG酶消化，使得最终的测序信息都来自于第一链cDNA，从而保留了RNA的链方向性。测序后的数据分析可确定转录本是来自正义还是反义DNA链。
| 组分 | NR603-01 (24 rxn) | NR603-02 (96 rxn) | |
| Box 1 | rRNA Probe (H/M/R) | 24 μl | 96 μl |
| Probe Buffer | 72 μl | 288 μl | |
| RNaseH Buffer | 24 μl | 96 μl | |
| RNaseH | 96 μl | 384 μl | |
| DNase I Buffer | 672 μl | 4 × 672 μl | |
| DNase I | 48 μl | 192 μl | |
| Box 2 | Frag/Prime Buffer | 444 μl | 2 × 888 μl |
| Actinomycin D (5 mg/ml) | 24 μl | 96 μl | |
| 1st Strand Buffer | 144 μl | 576 μl | |
| 1st Strand Enzyme Mix | 48 μl | 192 μl | |
| 2nd Strand Marking Buffer | 480 μl | 2 × 960 μl | |
| 2nd Strand/End Repair Enzyme Mix | 120 μl | 480 μl | |
| Box 3 | dA-Tailing Buffer Mix | 240 μl | 960 μl |
| dA-Tailing Enzyme Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Ligation Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Stop Ligation Mix | 120 μl | 480 μl | |
| PCR Primer Mix | 120 μl | 480 μl | |
| Amplification Mix | 600 μl | 4 × 600 μl | |
| Heat-labile UDG | 24 μl | 96 μl |
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