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常规转录组建库
VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®
● 对于复杂植物模板具有很高的成功率
● 建库流程与Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2相同
● 优化的大片段建库方案
● 测序数据与Illumina试剂具有高度的一致性
图1. 选择1 μg 或100 ng人胚肾上皮细胞HEK293总RNA、水稻幼苗总RNA、桃果实总RNA，用VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®分别构建插入片段大小为200-300 bp或150-200 bp的转录组文库。文库用Agilent 2100 Bioanalyzer进行分析。
表1. 1 μg 或100 ng universal human reference RNA分别用VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2构建文库。文库用Qubit定量后，按照相同浓度混样，用Hiseq 2500测序。可以看到，用Vazyme试剂盒构建的文库具有和Illumina非常近似的数据产出和数据质量。
图2. 1 μg (A)或100 ng (B) universal human reference RNA分别用VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2构建文库，用Hiseq 2500测序，分析数据均一性分布。可以看出，本产品构建的文库数据分布均匀，没有5’或3’偏好性，并且和Illumina试剂盒高度一致。
图3. 1 μg 或100 ng universal human reference RNA分别用VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®以及Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2构建文库，用Hiseq 2500测序，两两比较表达重复相关性，以spearman相关系数r表示。可以看出，1 μg (A)、100 ng (B)模板量下Vazyme VAHTSTM和Illumina TruSeq之间，以及用Vazyme VAHTSTM建库1 μg和100 ng之间 (C)的相关系数r均大于0.97，说明具有很高的表达重复相关性。
VAHTSTM mRNA-seq v2 Library Prep Kit for Illumina®适用于起始模板为0.1-1 μg总RNA的Illumina平台转录组文库构建。本产品的模板适应性广泛， 对于植物样本具有很高的建库成功率。本产品不仅提供与Illumina TruSeq RNA Sample Preparation Kit v2相同的建库流程 (插入片段150-200 bp)，还针对插入片段大于200 bp的文库提供优化的打断及分选条件。用本产品构建的文库在数据产出及数据质量上均与Illumina官方试剂盒保持高度的一致性。
产品组分
| 组分 | NR601-01 (24 rxn) | NR601-02 (96 rxn) | |
| Box1 | mRNA Capture Beads | 1.2 ml | 4.8 ml |
| Beads Binding Buffer | 1.2 ml | 4.8 ml | |
| Beads Wash Buffer | 9.6 ml | 38.4 ml | |
| Tris Buffer | 1.2 ml | 4.8 ml | |
| Box 2 | Frag/Prime Buffer | 468 μl | 2 × 936 μl |
| 1st Strand Buffer | 144 μl | 576 μl | |
| 1st Strand Enzyme Mix | 48 μl | 192 μl | |
| 2nd Strand Buffer | 4 80 μl | 2 × 960 μl | |
| 2nd Strand Enzyme Mix | 120 μl | 480 μl | |
| Box 3 | End Prep Mix | 960 μl | 4 × 960 μl |
| dA-Tailing Buffer Mix | 24 0 μl | 960 μl | |
| dA-Tailing Enzyme Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Ligation Mix | 60 μl | 240 μl | |
| Stop Ligation Mix | 12 0 μl | 480 μl | |
| PCR Primer Mix | 12 0 μl | 480 μl | |
| Amplification Mix | 6 0 0 μl | 2 × 600 μl |
贮藏与保质期
Box 1： 2-8°C保存。
Box 2 ：-20°C保存。
Box 3 ：-20°C保存。
适用范围
起始模板：0.1–1 μg完整度良好的总RNA。建议用Agilent 2100 Bioanalyzer对提取的总RNA进行质控，RIN值应≥8。不完整或降解的总RNA模板会给测序结果带来3’偏好性。
转录本信息：
本试剂盒适合于针对mRNA的RNA-seq分析，包括：基因表达、单核苷酸变异 (single nucleotide variation)，可变剪切/融合基因、目标转录组分析等。如果需要分析非编码RNA，请选择VAHTSTM Total RNA-seq Library Prep Kit for Illumina® (Vazyme #NR603)。
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