Product Brief

Instructions

所需材料：

10ul，100-200ul以及多通道移液器

96孔培养板

CO2培养箱

带有450nm滤光片的酶标仪

使用方法：

制作标准曲线

1.    先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2.    按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3.    接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD值为纵坐标的标准曲线，根据此标准线可以测定未知样品的细胞数量（使用此标准曲线的前提条件是实验的条件一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间）。

细胞活性检测

1.  收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100ul,使待测细胞调密度至(1000-10000)/孔。

2.  5%CO2，37℃培养细胞24小时（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异）。

3.  每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，其它情况以此类推。

4.  在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定（一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK- 8反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK- 8的培养时间一般为1- 4小时，注意：CCK- 8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准）。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

5.  在450nm测定吸光度。

细胞增殖-毒性检测

1.  收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，96孔板每孔加入100ul,使待测细胞调密度至(1000-10000)/孔。

2.  5%CO2，37℃培养细胞24小时（培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异）。

3.  加入10ul不同浓度的待测物质，将培养板在培养箱孵育一段适当的时间 (例如6,12, 24或48小时)。

4.  每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，其它情况以此类推。

5.  在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定（一般情况下，白细胞较难显色，因此需要较长的CCK- 8反应时间或增加细胞数量。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难显色。对于贴壁细胞，CCK- 8的培养时间一般为1- 4小时，注意：CCK- 8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准）。初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

6.  在450nm测定吸光度。

注意：如果待测物质有氧化还原性，可在加CCK-8之前更换新鲜的培养基，去掉待测物质的影响。

计算公式：

细胞存活率= [(实验孔-空白孔) / (对照孔-空白孔)]×100%

抑制率= [(对照孔-实验孔) / (对照孔-空白孔)]×100%

实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、待测物质)

对照孔(含有细胞的培养基、CCK-8、没有待测物质)

空白孔(不含细胞和待测物质的培养基、CCK-8)

疑难解答：