Product Brief

Instructions

A.石蜡切片染色程序:
1.载玻片防脱片剂处理:可选择 APES 或 Poly-Lysine。捞片后置烤箱 58-60 ℃30-60 分钟以使
切片紧密粘附。
2.切片脱蜡至水。
3.3%H2O2,室温 10 分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗 2 分钟×3 次。
4.根据抗原抗体情况，必要时对切片进行抗原热修复或消化处理。
5.滴加封闭液,室温 10 分钟。甩去多余液体, 不洗。
6.滴加适当稀释的一抗（羊 IgG），20-37 ℃ 1~2 小时或 4℃过夜。0.01M PBS 洗 2 分钟×
3 次。（一抗的稀释度、孵育时间、温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色
强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时
间。）
7.滴加聚合 HRP 标记抗羊 IgG（SV-0003）， 37℃孵育 30 分钟，PBS 或 TBS 冲洗，2 分钟
×3 次。
8.DAB 显色:按 100ml 0.02M PBS 或 TBS 中加入最终浓度为 25-50mgDAB,0.03%的 H2O2。
或使用 DAB 显色试剂盒(AR1022)。取 1ml 蒸馏水,加试剂盒中 A,B,C 试剂各 1 滴,混匀后加至
切片。室温显色, 镜下控制反应时间，一般 5-30 分钟。蒸馏水洗涤。
9.苏木素轻度复染、脱水,透明,封片、观察。B.血涂片，细胞和冰冻切片染色程序
1.载玻片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine）。抗凝血经分层离心后涂片；培养细胞也可涂片或
贴片生长；冰冻切片室温风扇吹干。
2.固定方案用 4%多聚甲醛或丙酮固定 10-20 分钟。
3.3%H2O2 1 份+纯甲醇 4 份混合,室温孵育 30 分钟，以灭活内源性过氧化物酶。蒸馏水洗 1-2
次。
其余步骤和石蜡切片 5-9 步相同。

如果冰冻切片直接染色结果不理想时,可以参照石蜡切片对切片进行热修复，方法和石蜡切片
4-9 步相同。