Product Brief

Instructions

注意事项：

1.温和的除垢剂裂解，产生的抽提物直接与BCA蛋白定量分析试剂或SDS-PAGE兼容。

2.抽提的可溶性蛋白处于非变性状态，可直接用于免疫沉淀反应和其他亲和纯化过程。

3.可透析，确保其与随后的分析系统兼容。

4.贴壁细胞可直接在板上裂解。

5.试剂已在几种不同类型的细胞系上进行了测试，包括COS-7，NIH3T3，Hepa1-6,293T，CHO等细胞。

6.蛋白质提取效率通常比冻融法和超声波法高。

7.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

使用方法:

注意：取适当量的裂解液，放与4℃预冷，使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

1.对于贴壁细胞，细胞刮刮下细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

注意：可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞，具体操作如下，

A.用移液枪小心吸去培养液，

B.加入适量的预冷的PBS,

C.用移液枪小心吸去PBS,

D.按照下表加入裂解液，4℃孵育30分钟。

E.将裂解液转入离心管中， 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

2.对于悬浮细胞，计数，并收集5×106 个细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，用预冷的PBS重悬细胞，600g 离心5分钟，尽量吸尽上清，加入0.5ml的预冷的裂解液，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 10000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

常见问题:         

结果实例1：

如图：细胞提取试剂提取不同细胞的蛋白，BCA测定蛋白浓度，上样20ug，跑胶，转膜，孵育博士德一抗，使用博士德发光显色液显影。

结果实例2：

依照本说明书操作，使用不同细胞得到的蛋白量。