Product Brief

Instructions

注意：取适当量的裂解液，放与4℃预冷，使用前数分钟内需加入酶抑制剂。

细胞样品：

1.对于贴壁细胞，去除培养液，用预冷的PBS洗一遍（可以直接将裂解液加入培养细胞的器皿中裂解细胞，对于不同规格标准培养板裂解液用量可见下表），并用细胞刮刮下细胞。3000g 离心5分钟收集细胞，尽量吸尽上清，加入适量的预冷的裂解液(5×106个细胞加入1ml的裂解液)，用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟, 14000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

2.对于悬浮细胞，3000g 离心5min收集细胞，用预冷的PBS洗一遍, 3000g 离心5min收集细胞，尽量吸尽上清,加入适量的预冷的裂解液（5×106个细胞加入1ml的裂解液）。用移液器吹打数下，冰上孵育30分钟， 14000g离心10分钟，取上清，即为蛋白提取物。

组织样品：

1.手术切除的组织块迅速置于预冷的生理盐水中，漂洗数次，洗净组织血迹，用滤纸吸干组织表面液体，将组织切成几个较小的组织块。 

2.称量组织，按组织净重（g）：裂解液(ml)=1：10的比例，加入相应体积的的预冷的裂解液进行匀浆(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液, 如果需要高浓度的蛋白样品, 可以适当减少裂解液的用量) 。

注意：匀浆后肉眼观察应没有明显的组织小块。

3.冰上孵育30分钟。

4.14000g离心10分钟,取上清,即为蛋白提取物。

注意事项：

1.抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

2.裂解得到的蛋白样品，含有较高浓度的去垢剂，不建议用Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

注：裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NFKB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。