E.coli DH5α Competent Cells 1 Set (100 μl × 10 支)

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E.coli DH5α Competent Cells 1 Set (100 μl × 10 支)

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货号：9057

品牌：TakaRa 宝生物

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商品介绍
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制品内容
E.coli DH5α Competent Cells	100 μl × 10
pUC19 plasmid ( 0.1 ng/μl)	10 μl
SOC medium^*	1 ml × 10

*SOC medium: 2%		Bacto tryptone
0.5%		Bacto yeast extract
10 mM		NaCl
2.5 mM		KCl
10 mM		MgSO4
10 mM		MgCl2
20 mM		Glucose

■ 制品说明

Takara公司在Hanahan's method基础上进行了改良，制备出E.coli DH5α Competent Cells。 E.coli DH5α Competent Cells在使用pUC系列质粒载体进行DNA转化时，利用β-半乳糖苷酶活性 (α-互补性)，通过蓝白斑方法可以很容易地鉴别重组体菌株。由于菌株无lac l^q，故不需要IPTG。因此，当制作基因文库或进行亚克隆时，可以使用X-Gal筛选重组DNA或重组质粒。
X-Gal : 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-β-D-Galactoside

■ 细胞浓度

1 - 2×10⁹ cells/ml

■ Genotype

E.coli DH5α : F^-, φ 80dlacZ ΔM15, Δ(lacZYA -argF )U169, deoR , recA1 , endA1 , hsdR17 (rK^-, mK⁺), phoA, supE44 , λ^-, thi -1, gyrA96 , relA1

■ 保存

-80℃。
注意： -80℃或更低温度下保存。如果保存温度不能恒定，转化降低将会降低。请使用附带的pUC19 对照质粒来确认保存细胞的转化效率。不能液氮保存。

■ 转化效率

转入1 ng 的pUC19，涂于含有Amp⁺ 的选择培养基进行筛选。
转化效率 : >1 x 10⁸ cfu/μg pUC19

■ β-半乳糖苷酶的α-互补性

当使用pUC19 plasmid进行转化时，含有100 μg/ml Ampicillin和60 μg/ml X-Gal的L-agar plate出现蓝色菌落。

■ 注意事项

1. 将感受态细胞从-80℃冷冻取出后请立即置于干冰/乙醇中。使用前保存于干冰/乙醇中。

2. 可使用1.5 ml microcentrifuge tubes代替14 ml 圆底 tubes (BD company Code: 352059 或 352057,等)，但效率可能会降低。

3. 当使用100 μl感受态细胞时，加入的高纯度DNA样品不要超过10 ng。否则转化效率会降低。

4. 当改变感受态细胞数量或tubes类型时，适当调整反应条件。例如，当使用1.5 ml microcentrifuge tubes时，42℃放置60秒而不是45秒。

5. L-broth 或φb-broth可替代SOC培养基。此时，转化效率可能会降低。

·L-broth :	Ingredient	per liter water
	Bacto tryptone	10 g
	Bacto yeast extract	5 g
	NaCl	5 g
用1 N NaOH调整pH到7.5并高压灭菌。
·φ b-broth:	Ingredient	per liter water
	Bacto tryptone	20 g
	Bacto yeast extract	5 g
	MgSO4·7H2O	5 g
用1 N KOH调整pH到7.5并高压灭菌。