P450-Glo™ 筛选系统(P450-Glo™ Screening Systems)提供了使用发光方法进行细胞色素P450(CYP450)酶活检测所需的所有试剂。该系统包括:含有重组人CYP450 酶的膜制备物、细胞色素P450 所对应的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。膜制备物是从感染了杆状病毒的昆虫细胞制备而来,含有人CYP450 和 P450 还原酶(CYP2C9 和 CYP3A4 中还带有细胞色素b5)。P450-Glo™ 筛选系统还包含灭活细胞色素P450 活性的膜制备物,作为阴性对照。这些检测试剂盒特别适合于检测药物和新化合物对细胞色素P450 酶类活性的影响。
细胞色素P450 反应是通过将 CYP450 发光前体底物与 CYP450 酶和 NADPH 再生系统共同孵育而进行。P450-Glo™ Substrates(P450-Glo™ 发光前体底物)是萤火虫萤光素酶底物甲虫萤光素((4S)-4,5-dihydro-2-(6-hydroxybenzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylicacid 或 D-luciferin)的衍生物。P450-Glo™ Substrates 不与萤光素酶发生反应,然而,当 P450 酶类将其转换成萤光素时,即可与萤光素酶作用而发光。发光的强度与 P450 酶的活性直接呈正比。使用光信号来检测 CYP450 的活性,因为由细胞色素P450 产生的 D-luciferin 的量与光的亮度直接成正比。
含 Luciferin-IPA 的 P450-Glo™ CYP3A4 检测试剂盒包含我们最新的 CYP3A4 底物,该底物是现有的 P450-Glo™ 3A4 底物中最灵敏的底物。在所有的P450-Glo™ CYP3A4 底物中,Luciferin-IPA 表现出最宽泛的抑制谱。
DMSO(Dimethyl sulfoxide,二甲亚砜)即使在很低的浓度(<0.1%) 下,仍然可以抑制细胞色素P450 中 3A4 异构体的活性。P450-Glo™ CYP3A4 System (Luciferin-PPXE)DMSO-Tolerant Assay 是专为在 3A4 反应中耐受 DMSO 而设计。与不含 DMSO 的对照相比,该检测法在 0.2% 的 DMSO 存在时,信号:背景比很少改变或不改变。
在细胞色素P450 反应之后,再加入Luciferin Detection Reagent(萤光素检测试剂)。该试剂在终止细胞色素P450 反应的同时,也产生了稳定的辉光型发光信号。辉光型反应产生稳定的信号,从而无需严格控制发光信号检测的时间。本产品的操作手册是为多孔板模式而制作的,但也很容易应用到单管模式中。
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