P450-Glo™ CYP450 Assays(P450-Glo™ CYP450 检测试剂盒)为检测细胞色素P450 酶类活性的均质的发光检测方法。这些检测试剂盒用于检测重组的和天然的 P450 酶类的活性,也可用于评估受试样品(如药物或新化合物)对 P450 酶类活性的影响。这些发光法检测试剂盒具有卓越的灵敏度、极低的背景信号和宽广的动态范围。 P450-Glo™ 检测试剂盒采用的 P450 发光前体底物为甲虫萤光素的衍生物。未发生反应时,该衍生物不是萤光素酶的底物,然而,当 P450 酶类将该物质转换成萤光素时,即成为萤光素酶的底物,并与萤光素酶作用而发光,发光的强度与 P450 酶的活性直接呈正比。 P450-Glo™ 检测试剂盒产生“辉光型”的发光信号,该光信号由重组的稳定化处理的萤光素酶(超稳萤光素酶,Ultra-Glo™ luciferase)以及专利的缓冲液系统共同作用产生的。发光信号的半衰期大于 2 个小时,因而不要求发光检测仪必须带有自动进样器,并可批量处理样品。当筛选细胞色素P450 酶类的抑制剂时,该系统的独特配方还可以减少由于受试样品而导致的萤光素酶活性抑制所带来的假阳性结果。 P450-Glo™ CYP1A2 Induction/Inhibition Assay 含有针对细胞色素1A2 最新的底物,能够很好地应用于包括人体 CYP1A2 在内的全部反应,是有关细胞方面应用的最好底物。该底物 Luciferin-1A2 能够很快被细胞摄取并通过 CYP1A2 将其转化为荧光素前体。在加入 D-半胱氨酸后,该荧光素前体很快被转化为荧光素。应用 Luciferin-1A2 后,整个反应的时间仅在大约1小时内即可完成。使用 Luciferin-1A2 所带来的低背景和高信噪比意味着能够将初始样品量降到最低。 P450-Glo™ 筛选系统(P450-Glo™ Screening Systems)提供了使用发光方法进行细胞色素P450 (CYP450) 酶活检测所需的所有试剂。该系统包括:含有重组人 CYP450 酶的膜制备物、细胞色素P450 所对应的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。膜制备物是从感染了杆状病毒的昆虫细胞制备而来,含有人 CYP450 和 P450 还原酶(CYP2C9 和 CYP3A4 中还带有细胞色素b5)。P450-Glo™ 筛选系统还包含灭活细胞色素P450 活性的膜制备物,作为阴性对照。这些检测试剂盒特别适合于检测药物和新化合物对细胞色素P450 酶类活性的影响。
参见表1了解细胞色素酶P450、建议使用的底物和实验方法。
特点 - 优点
• 试剂盒配置完备:该系统包括含有重组人细胞色素P450 酶的膜制备物、适合细胞色素P450 的发光前体底物、NADPH 再生系统、反应缓冲液、萤光素检测试剂、以及无萤光素的水。 应用• 从不同的表达系统中如 Sf9 细胞和E.coli检测膜组分中重组 CYP1A2 的活性 • 从组织和细胞的微粒体等结构中检测天然 CYP1A2 的活性 • 从药物和化合物对于天然或重组 CYP1A2 活性的影响对其进行筛选 |
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