该试剂盒的操作分两步进行:1) 在 ADP 生成反应完成后,加入等体积的 ADP-Glo™ 试剂终止反应,并消耗尽剩余的 ATP;2) 加入 ADP-Glo™ Max 检测试剂,将 ADP 转变为 ATP 的同时,在偶联的萤光素酶/ 萤光素反应中将 ATP 转变为光信号。
ADP-Glo™ Max Assay 具有宽广的动态范围,即使在 ATP 到 ADP 的转化率很低时,也能产生强信号,使其非常适合筛选低活性的 ATP 酶,如药物的膜转运子、热休克蛋白等。该试剂盒产生的假阳性率极低,Z` 值大于0.7。
• 在 ATP 转化率低时,信号强度仍然很高:用户可以检测到更加接近于真实生理条件下的酶活性,使得这种检测法非常适合低活性的 ATP 酶/激酶。
• 灵敏:对低浓度的 ADP 敏感,因此比其他试剂盒需要的酶更少,节约成本。
• 通用:几乎可用于任何可生成 ADP 的酶,使得研究人员可用单个平台筛选更加广泛的酶类。
• 适用于范围广泛的 ATP 水平:在 ATP 浓度高达 5mM 时仍适用,对于对 ATP 具有高 Km 值的酶类以及酶的作用模式研究非常重要。
• 准确:在宽广的 ATP 起始浓度范围内,准确地检测 ADP 水平。使用者确信检测到的活性能真实地反映酶活性,产生的 IC 50s 的准确性可与基于放射性的检测法媲美。
• 筛选对靶酶起作用的化合物库
• 实施对感兴趣的酶的行为模式研究
• 免疫沉淀的ATPases/激酶的活性检测
ADP-Glo™ Applications Database。
ADP-Glo™ Max Assays 含有足够的试剂执行指定数量的反应,在 384- 孔板中对每个样本分别使用 5μl、5μl 和 10μL 的酶反应试剂、ADP-Glo™ 试剂和 ADP-Glo™ Max 检测试剂。
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