Non-Radioactive Phosphatase Assay Systems(非放射性磷酸酶检测系统)是测定蛋白磷酸酶活性的一个方便、灵活的方法。该系统确定的是游离磷酸的量,是通过反应中形成的钼酸盐: 孔雀绿: 磷酸复合物的吸光度值检测出来的。该系统可与多种缓冲液组分和多种底物一起使用,包括天然的磷酸化蛋白和合成的磷酸肽。丝氨酸/苏氨酸磷酸酶分析试剂盒包含化学合成的磷酸肽 RRA(pT)VA ,它是一种与多种丝氨酸/ 苏氨酸磷酸酶(包括蛋白磷酸酶 2A、2B 和 2C)适合的底物。然而提供的磷酸肽不是蛋白磷酸酶 1 的最适底物,因为蛋白磷酸酶 1 对于底物的结构要求十分严格。 酪氨酸磷酸酶分析试剂盒包括两种化学合成的磷酸肽、END (pY) INASL 和 DADE(pY) LIPQQG,是大多数酪氨酸磷酸酶的底物。使用该系统检测磷酸酶时,有效的磷酸盐测定范围是 100-4,000pmol。该磷酸酶检测系统可以用于检测以下样品中的磷酸酶活性:细胞粗提物、组织提取物、部分纯化的样品、纯化后的样品。对于粗提物的应用而言,高浓度的磷酸需要在检测之前去除掉,使用提供的离心柱可以快速去除样品中游离的磷酸盐和其它的小分子量抑制剂。此外,独特的钼酸盐染料添加剂与钼酸盐染料溶液结合使用,可帮助暴露在酸性的钼酸盐染料溶液的蛋白质溶解,单独使用钼酸盐染料溶液时,会引起蛋白沉淀。 应用更多信息请参见 Protocols & Applications Guide。 |
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