cAMP-Glo™ Max Assay(cAMP-Glo™ Max 检测试剂盒)是一种均质的、利用生物发光原理检测细胞内环腺苷酸(cAMP)水平的高通量方法。若某种化合物能调节与腺苷酸环化酶偶联的 G 蛋白偶联受体(GPCR),则会明显地改变细胞内的 cAMP 水平。cAMPGlo™ Max Assay 用于监测细胞内的 cAMP 水平在以下应答反应中的改变:激动剂、拮抗剂、及受试化合物对 GPCR 的效应。这种检测方法的原理是:cAMP 激活蛋白激酶 A(PKA)全酶的活性,降低 ATP 含量,从而引起 ATP 偶联的萤光素酶反应的光信号降低。 cAMP-Glo™ Max Assay 将裂解缓冲液与 cAMP 反应缓冲液合二为一,成为 cAMP-Glo™ ONE Buffer(cAMP-Glo™ ONE 缓冲液)。这种新的规格简化了实验操作过程,减少了完成检测所需的时间。新的 ONE Buffer 以 5 倍浓度提供,为细胞培养液的起始体积提供更多的灵活性。 cAMP-Glo™ Max Assay 可在 96 孔、384 孔和 1536 孔板中进行检测。用一种测试化合物对细胞进行适当时间的诱导,可以调节 cAMP 水平。诱导后,裂解细胞,释放的 cAMP 激活试剂中的蛋白激酶 A(图1)。然后加入 Kinase-Glo® Reagent 终止 PKA 反应,并用萤光素酶反应检测剩余 ATP。培养板放置于微孔板发光检测仪中读取数据。发光信号的半衰期超过 4 个小时,使得研究人员有足够的时间来读数,实验用的发光检测仪也不需要带有进样器。
特点 - 优点
• 快速、易用:
- 改进的性能 —— 裂解和 cAMP 检测过程合二为一(cAMP-Glo™ ONE Buffer)。 - ONE Buffer —— 5 X 的缓冲液为细胞培养液的起始体积提供了更多的灵活性。 - 检测可在大约 30 分钟内完成。 • 优良的信噪比: - 在所有的检测 cAMP 的试剂盒中,信号/ 背景的比率最高。 - 信号/ 背景的比率 >200(cAMP),>15(细胞)。 - 体系易于扩展为 1536 孔板或更多。 • 行之有效的发光技术: - 由 Ultra-Glo™ 重组萤光素酶驱动。 - 无荧光化合物的干扰。 - 无放射性。 应用• 对文库化合物进行高通量筛选,鉴定 GPCR 活性调节物 • 能够在多种类型的细胞内简便的对 cAMP 水平进行量化 注意事项Cat.# V1681 试剂量足够完成 2 板(96 和 384 孔板)。Cat.# V1682 试剂量足够完成 20 板(96 和 384 孔板)。Cat.# V1683 试剂量足够完成 200 板(96 和 384 孔板)。 |
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