NanoLuc®(Nluc)luciferase(NanoLuc® 萤光素酶)是一个经过基因工程改造的小分子酶(19.1kDa),是性能卓越的生物发光报告基因。该酶比萤火虫(Photinus pyralis)或海肾(Renilla reniformis)萤光素酶的发光亮 100 倍,它使用一种新型底物——furimazine,可产生高强度、辉光型发光。生物发光反应不依赖 ATP,同时抑制背景发光以获得最高检测灵敏度。 目前已构建多种类型的 NanoLuc® 萤光素酶报告基因载体,以满足不同的实验需求。非融合的 Nluc 提供了最大的光输出和灵敏度,NanoLuc®-PEST(NlucP)将蛋白表达水平变化与转录活性改变密切偶联,并增加信噪比,融合 N- 末端分泌信号(secNluc)的 NanoLuc® 萤光素酶适用于分泌型报告基因试验。使用 Nano-Glo® 萤光素酶检测试剂,发光量在跨越 1,000,000 倍的酶浓度范围内呈线性关系,且信号半衰期≥ 2 小时。 NanoLuc® 萤光素酶具有许多使之成为出色报告基因蛋白的物理特性:• 分子量非常小,单体酶(171 个氨基酸;513bp) • 热稳定性高(Tm=60℃) • 在很宽的pH 范围内有活性(pH 值6-8) • 没有翻译后修饰或二硫键 • 均匀分布在细胞中 • 发射光谱非常适合于生物发光共振能量转移(BRET;λmax=465nM)。
为满足利用报告基因研究转录调控,我们提供多种表达不同类型 NanoLuc® 萤光素酶(非融合型 Nluc、PEST 不稳定型 NlucP、分泌型 secNluc)的质粒载体。不同的 pNL 载体用途如下:
应用• 翻译调控 • 病毒-细胞相互作用 • 化合物筛选 • 翻译后修饰 • GPCR 信号 • 细胞信号 • 启动子分析 |
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