TSAP Thermosensitive Alkaline Phosphatase(TSAP 热敏感碱性磷酸酶)可以催化 DNA 的 5'- 末端去磷酸基团,阻止线性化的克隆载体 DNA 在连接反应中重新环化及再连接;对于 3' 突出端、5' 突出端及平末端都具有活性。也可通过 5' 末端磷酸基团的脱磷酸来制备 5' 末端标记 DNA。 TSAP 在 74℃加热 15 分钟会发生不可逆的失活。因此在连接反应之前不需要纯化 DNA。在多种条件下测试,TSAP 在所有的限制性内切酶反应缓冲液中都具有活性,这有利于限制性酶切反应、去磷酸化和连接反应的连续进行。 特点 - 优点• 易操作:TSAP 在 Promega 所有的限制性酶切缓冲液中都有活性,可以省掉纯化步骤或者不需更换缓冲液。• 加热失活:当 74℃加热 15 分钟后,TSAP 完全不可逆失活,这使得碱性磷酸酶处理后无需纯化即可进行下游操作,如内切酶消化、脱磷酸及连接操作。 • 蓝/ 白克隆验证:Promega 的蓝/ 白克隆检测为用于克隆的酶提供了高水平的质量控制。 • 提供 MULTI-CORE™ 反应缓冲液。 应用• 通过移除 5' 端磷酸基团,防止克隆空白载体线性化 DNA 的重连 • 在用 T4 多聚核苷酸激酶进行末端标记前移除 5' 端磷酸基团 更多信息,请见 Protocols & Applications Guide。 |
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