E.coli S30 Extract System for Linear Templates(用于线性 DNA 模板的 E.coli S30 提取物系统)的制备采用并稍加改进了 Lesley 及其同事描述的操作方法,用于对线性 DNA 模板进行转录/ 翻译反应。研究者只需提供含有一个原核 E.coli 样的启动子(如 lac UV5、tac、λ PL (con) 和 λ-PR) 的线性 DNA 即可,DNA 模板还需有一个核糖体结合位点以直接在体外合成蛋白。在体外从 DNA 模板合成的、缺少 E.coli 启动子的 RNA 也可以用于这个系统中,但比起从线性 DNA 模板产生而来的蛋白质来说,产量会下降 1-10%。 特点 - 优点
• 灵活:可使用多种模板:DNA 片段、PCR 合成的 DNA、连接后的寡聚核苷酸、体外生成的 RNA 和原核 RNA。
• 稳定性增加:减少了翻译蛋白被降解的可能性。 • 完备:包含了偶联的转录/ 翻译反应需要的所有组分。 • 低背景:系统合成的内源蛋白质水平极低。 • 已优化:每批的 S30 提取物的预混合物已经经过优化,包括所有其它必需组分(氨基酸除外),如核糖体、各种 tRNA、PEP(磷酸烯醇丙酮酸)和盐类。 应用• 从线状或闭合环状的 DNA 中鉴定克隆和合成的基因 • 基因的快速结构定位,无需额外的克隆步骤 • 体外生成突变的快速验证 • 快速合成截短蛋白产物用于功能结构域或表位定位研究 • 体外生成的缺乏合适 E.coli 启动子基因的 RNA 的表达 更多信息,请参看“Protocols & Applications Guide”。 |
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