SIRT-Glo™ Assays Screening Systems(SIRT-Glo™ 检测试剂盒及筛选系统)是单试剂均质发光检测试剂盒,用于检测来源于纯化酶类的、NAD+ 依赖的第 III 类组蛋白去乙酰酶(sirtuins;SIRTs)的相对活性。SIRT-Glo™ 检测试剂盒使用一种乙酰化发光肽底物,该底物能被 SIRT 的活性去乙酰化。氨基萤光素肽底物的去乙酰化可通过一个偶联的酶反应来检测;在这个反应中,显影试剂(Developer Reagent)中的蛋白酶可将去乙酰化的肽从氨基萤光素底物上切除下来,释放的氨基萤光素可用 Ultra-Glo™ 重组萤火虫萤光素酶反应来定量。该检测法可在 15–45 分钟内完成,无需样品操作。SIRT 介导的发光信号持久,半衰期大于 3 个小时,可以对多孔板进行批量操作。SIRT-Glo™ 检测法可广泛应用于 NAD+ 依赖的 Sirtuin 酶类。 烟酰胺(Nicotinamide)包含在 SIRT-Glo™ 筛选系统内,也可以单独购买,是已知的 SIRT 抑制剂,可用作阳性对照。烟酰胺以 1M 的浓度提供,溶于 SIRT-Glo™ 缓冲液中。HeLa 细胞核提取物(HeLa Nuclear Extract)包含在 SIRT-Glo™ 筛选系统内,也可以单独购买,可用作检测法的对照。HeLa 细胞核提取物以 5mg/ml 的浓度提供。 SIRT-Glo™ 对照底物只能单独购买,是 SIRT-Glo™ 底物的非乙酰化形式,两者具有相同的氨基酸序列。SIRT-Glo™ 对照底物可与 SIRT-Glo™ 检测试剂盒及筛选系统一起使用,用于验证二级筛选中真实的 SIRT 抑制作用。对照底物以 10mM 的浓度提供;当与 SIRT-Glo™ 检测试剂盒或筛选系统中的 SIRT-Glo™ 试剂一起使用时,在 96 孔板检测模式下,足够进行 480 次检测。 特点 - 优点• 去乙酰化活性的简单检测方法:采用单试剂均质检测方法,操作步骤仅需加样 - 混合 - 检测,轻松用于从普通实验到筛选实验的各种实验。 • 灵敏度高:比荧光法灵敏度高 10-100 倍。 • 快速获得数据:仅需 10-15 分钟即可产生最大信号,辉光型信号持久稳定。 应用• 测定SIRT抑制剂或激活剂的活性 • SIRT酶的描绘 注意事项G6450 对于 96 孔板能进行 100次检测,每次 100μl;对于 384 孔板进行 400次检测,每次 25μl。G6451 对于 96 孔板能进行 500次检测,每次 100μl;对于 384 孔板进行 2,000次检测,每次 25μl。G6452 对于 96 孔板能进行 1,000次检测,每次 100μl;对于 384 孔板进行 4,000次检测,每次 25μl。 G6470 对于 96 孔板能进行 100次检测,每次 100μl;对于 384 孔板进行 400次检测,每次 25μl。G6471 对于 96 孔板能进行 500次检测,每次 100μl;对于 384 孔板进行 2,000次检测,每次 25μl。
G6460 溶度为 10mM,在和 SIRT-Glo™ Reagent 共用时能够在 96 孔板中进行 480次检测。
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