0
|
HaloTag® Protein Purification System （HaloTag® 蛋白纯化系统）被设计用于纯化 HaloTag® 融合蛋白，HaloTag® 是一种新型蛋白标签，能够增强重组蛋白的表达产率和可溶性。HaloTag® 技术能够将目的蛋白以共价结合的形式、高效并特异地捕获到 HaloLink™ 树脂上，因此克服了其它使用亲和标签进行蛋白纯化的方法所带来的、基于平衡反应的限制因素（例如，低水平表达蛋白的低效捕获和冲洗纯化树脂导致的蛋白流失）。 可利用 HaloTag® 技术快速、方便地检测 HaloTag® 融合蛋白，也可监测 HaloLink™ 树脂对蛋白的固定化效率，这是通过使用 HaloTag® TMR 荧光配基进行标记，然后再进行 SDS-PAGE 而实现的。实验指南可在下述技术手册中找到：HaloLink™ Resin 技术手册 #TM250，HaloLink™ Protein Array 技术手册 #TM310 和 HaloCHIP™ System 技术手册 #TM075。 实验过程概述HaloTag® 蛋白是一个 34kDa 的突变水解酶，通过一个被固化的氯化烷配基与 HaloLink™ 树脂发生共价结合。TEV 蛋白酶可从 HaloLink™ 树脂上将目的蛋白切下。TEV 蛋白酶具有一个 N 端 HQ 标签，可以使用 HisLink™ 树脂与目的蛋白分离开，这样就得到了纯化的目的蛋白。编码 HaloTag® 蛋白并能够在大肠杆菌中使目的蛋白达到最优表达的最适载体是 pFN18A HaloTag® T7 Flexi® Vector（G2751）和 pFN18K HaloTag® T7 Flexi® Vector（G2681）。这些载体可以单独购买。 特点 - 优点
• 与His-Tag、GST 和 MBP 亲和标签相比较，本系统产量大、纯度高、能够获得具有功能的可溶性蛋白：HaloLink™ 树脂以共价结合的方式捕获和固定HaloTag® 融合蛋白，特异性高。
• 在原核、哺乳动物细胞和无细胞表达系统中，目的蛋白的表达得到增强：蛋白以 HaloTag® 融合蛋白的形式表达。 • 纯化表达量少的融合蛋白：HaloLink™ 树脂能快速、特异性地以共价结合的方式捕获 HaloTag® 蛋白，这是一个非平衡过程。 • 使用 TEV 蛋白酶剪切，可高效回收目的蛋白：TEV 蛋白酶剪切 HaloTag® 蛋白和目的蛋白之间的连接肽段，其识别位点已经经过优化。由于是共价连接，HaloTag® 蛋白仍固定在树脂上。 • 节省时间：仅使用一种与下游应用兼容的缓冲液，即可支持所有的纯化步骤。 • 使用 HaloTag® 荧光配基可轻松实现凝胶内检测和蛋白表达水平的定量：HaloTag® 蛋白- 配基相互作用非常稳定，可以在含有 SDS 的样品缓冲液中煮沸，并直接使用 SDS-PAGE 分离。 应用• 在大肠杆菌中进行有 HaloTag® 标签蛋白的纯化，特别是那些难表达的蛋白 • 哺乳动物或无细胞表达 HaloTag® 标签蛋白的纯化 注意事项Cat.# G6280 包含 100ml 25% 的 HaloLink™ Resin，TEV Protease 和 HisLink™ Resin混合液；Cat.# G6270 包含 10ml 25%的 HaloLink™ Resin，TEV Protease 和 HisLink™ Resin的混合液。 |
温馨提示:因厂家更改产品包装、产地或者更换随机附件等没有任何提前通知，且每位咨询者购买情况、提问时间等不同，为此以下回复仅对提问者3天内有效，其他网友仅供参考！若由此给您带来不便请多多谅解，谢谢！
服务热线
0771-3293894
新浪微博
腾讯微博
QQ空间
客服
