HaloTag® Protein Purification System (HaloTag® 蛋白纯化系统)被设计用于纯化 HaloTag® 融合蛋白,HaloTag® 是一种新型蛋白标签,能够增强重组蛋白的表达产率和可溶性。HaloTag® 技术能够将目的蛋白以共价结合的形式、高效并特异地捕获到 HaloLink™ 树脂上,因此克服了其它使用亲和标签进行蛋白纯化的方法所带来的、基于平衡反应的限制因素(例如,低水平表达蛋白的低效捕获和冲洗纯化树脂导致的蛋白流失)。 可利用 HaloTag® 技术快速、方便地检测 HaloTag® 融合蛋白,也可监测 HaloLink™ 树脂对蛋白的固定化效率,这是通过使用 HaloTag® TMR 荧光配基进行标记,然后再进行 SDS-PAGE 而实现的。实验指南可在下述技术手册中找到:HaloLink™ Resin 技术手册 #TM250,HaloLink™ Protein Array 技术手册 #TM310 和 HaloCHIP™ System 技术手册 #TM075。 实验过程概述HaloTag® 蛋白是一个 34kDa 的突变水解酶,通过一个被固化的氯化烷配基与 HaloLink™ 树脂发生共价结合。TEV 蛋白酶可从 HaloLink™ 树脂上将目的蛋白切下。TEV 蛋白酶具有一个 N 端 HQ 标签,可以使用 HisLink™ 树脂与目的蛋白分离开,这样就得到了纯化的目的蛋白。编码 HaloTag® 蛋白并能够在大肠杆菌中使目的蛋白达到最优表达的最适载体是 pFN18A HaloTag® T7 Flexi® Vector(G2751)和 pFN18K HaloTag® T7 Flexi® Vector(G2681)。这些载体可以单独购买。 特点 - 优点
• 与His-Tag、GST 和 MBP 亲和标签相比较,本系统产量大、纯度高、能够获得具有功能的可溶性蛋白:HaloLink™ 树脂以共价结合的方式捕获和固定HaloTag® 融合蛋白,特异性高。
• 在原核、哺乳动物细胞和无细胞表达系统中,目的蛋白的表达得到增强:蛋白以 HaloTag® 融合蛋白的形式表达。 • 纯化表达量少的融合蛋白:HaloLink™ 树脂能快速、特异性地以共价结合的方式捕获 HaloTag® 蛋白,这是一个非平衡过程。 • 使用 TEV 蛋白酶剪切,可高效回收目的蛋白:TEV 蛋白酶剪切 HaloTag® 蛋白和目的蛋白之间的连接肽段,其识别位点已经经过优化。由于是共价连接,HaloTag® 蛋白仍固定在树脂上。 • 节省时间:仅使用一种与下游应用兼容的缓冲液,即可支持所有的纯化步骤。 • 使用 HaloTag® 荧光配基可轻松实现凝胶内检测和蛋白表达水平的定量:HaloTag® 蛋白- 配基相互作用非常稳定,可以在含有 SDS 的样品缓冲液中煮沸,并直接使用 SDS-PAGE 分离。 应用• 在大肠杆菌中进行有 HaloTag® 标签蛋白的纯化,特别是那些难表达的蛋白 • 哺乳动物或无细胞表达 HaloTag® 标签蛋白的纯化 注意事项Cat.# G6280 包含 100ml 25% 的 HaloLink™ Resin,TEV Protease 和 HisLink™ Resin混合液;Cat.# G6270 包含 10ml 25%的 HaloLink™ Resin,TEV Protease 和 HisLink™ Resin的混合液。 |
温馨提示:因厂家更改产品包装、产地或者更换随机附件等没有任何提前通知,且每位咨询者购买情况、提问时间等不同,为此以下回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!若由此给您带来不便请多多谅解,谢谢!
服务热线
0771-3293894