蛋白阵列能够平行分析多组蛋白: 蛋白与蛋白、蛋白与药物或者蛋白与核酸之间的相互作用。HaloLink™ Protein Array Systems(HaloLink™ 蛋白阵列系统)提供了一种新的创建客户自定义的蛋白阵列的方法。该方法是创新的 HaloTag® 技术、表面材料工程以及无细胞蛋白表达系统等优势的结合。
HaloTag® 蛋白是一个突变的水解酶,能够与 HaloTag® 配基形成共价结合。在生理条件下,该结合反应快速、特异性高,得到的复合物在苛刻条件下依然能够保持稳定。使用 HaloLink™ 蛋白阵列系统时,在无细胞表达系统中表达出 HaloTag® 蛋白,然后在水凝胶包被的玻片上被共价捕获,该玻片连接着 HaloTag® 配基。在无细胞表达系统中产生的融合蛋白无需预先纯化,可以直接用于蛋白捕获。使用这种方法可以在玻片表面同时快速合成和固定多个融合蛋白。在不到 8 小时内,可以完成包括表达蛋白、制定蛋白阵列布局和分析蛋白相互作用在内的一整套实验。
HaloLink™ Array Six Slide System(HaloLink™ 阵列六玻片系统)内含 HaloLink™ 玻片、HaloLink™ 密封垫和抗 HaloTag® 抗体。欲使用六玻片系统,您需要自己准备蛋白表达系统或者订购 TNT®T7 Quick Coupled Transcription/Translation System(Cat.# L1170 或 L1171)或 TNT® SP6 High-Yield Wheat Germ Protein Expression System(Cat.# L3260 或 L3261)。六玻片系统中不包含 HaloTag® Standard Protein(HaloTag® 标准蛋白,Cat.# G4491),但可以单独购买。
HaloTag® 技术提供了一种快速和简便的方法,通过荧光 HaloTag® TMR 配基标记加上 SDS-PAGE 分析来检测 HaloTag® 融合蛋白的表达。HaloLink™ Protein Array 技术手册(TM310)中有操作指南。
Protein G HaloTag® Fusion Protein(Protein G HaloTag® 融合蛋白,Cat.# G7291)由一个来自链球菌的不含白蛋白结合结构域的重组 Protein G 和HaloTag® 蛋白组成。Protein G HaloTag® 融合蛋白分子量为 58kDa,可共价结合到不同的氯代烷表面、活性和荧光 HaloTag® 配基上。该融合蛋白使得抗体定向结合于 HaloLink™ 蛋白芯片上。
特点 - 优点
• 快速生产蛋白:无细胞表达系统可以在单管中用偶联的转录/ 翻译方式快速生产目的蛋白,用于蛋白阵列实验。
• 蛋白捕获是不可逆的:使用其它亲和标签进行捕获的蛋白易于从结合物的表面脱离下来,本方法与此不同,HaloTag® 融合蛋白与 HaloLink™ 玻片是共价结合的。
• 无需蛋白纯化步骤:目的蛋白直接从无细胞表达反应体系中被捕获。
• 非特异结合减少:HaloLink™ 玻片具有独特的水凝胶包被,此设计可以防止非特异结合,同时保护特异结合的蛋白的功能。
• 可耐受反复冲洗:HaloTag® 融合蛋白和 HaloLink™ 玻片的共价结合可耐受反复而严格的冲洗,这能减少背景和降低假阳性率。
• 无需机械手:每个阵列为 50 个点,可手工完成多个相互作用的同时研究,无需复杂的机械手。
• 高效的抗体结合:与其它直接捕获的方法相比,Protein G HaloTag® 融合蛋白增强了抗体与表面的结合。
应用
• 蛋白: 蛋白相互作用
• 蛋白: 药物相互作用
• 蛋白: 核酸相互作用
• 抗体固定
注意事项
Protein G HaloTag® Fusion Protein(Cat.# G7291)不可与 Magne™ HaloTag® Beads(Cat.# G7281)一起使用;这些磁珠不适合免疫球蛋白纯化。
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