这些载体用于在大肠杆菌和无细胞表达系统中通过 T7 RNA 聚合酶启动子进行 HaloTag® 融合蛋白的诱导表达。表达水平高度依赖于蛋白质的特性,但是一般 N- 末端 HaloTag® 融合蛋白(如 pFN18A/ K,Cat.# G2751,G2681)可以提高表达水平、增强复性,并提高所表达蛋白的溶解度。有两种类型的HaloTag® 载体:应用传统克隆方法的多克隆位点(MCS)载体和 Flexi® 系统载体。 Flexi® 载体系统是一种简单的蛋白编码序列的定向克隆方法。该方法建立在两种位点稀有的限制性酶 Sgfl 和 Pmel 基础上,可以将蛋白编码区在不同的Flexi® 载体之间转换,而不需要重新测序,该方法快速、有效、保真度高。只有两个 N- 末端标记的载体或者从 N- 末端到 C- 末端的载体可以发生直接转化,多克隆位点载体和几个 Flexi® 系统载体一个 His6-HaloTag® 双重标签。这种双标签能够使用重复利用的镍树脂进行蛋白质纯化,保留了 HaloTag® 共价标记属性。
多克隆位点载体 pH6HTC His6HaloTag® T7 Vector(Cat.# G8031)用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 C- 末端 His6-HaloTag® 双标签蛋白的表达。
Flexi® 系统载体 pFN18A/KHaloTag® T7 Flexi® Vectors(Cat.# G2751,G2681)用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 N- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。 pFN19A/KHaloTag® T7 SP6 Flexi® Vectors(Cat.# G1891,G1841)用于大肠杆菌和 T7 SP6 无细胞表达系统中具有 N- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。这些载体经优化适用于无细胞表达系统。 pFC20A/KHaloTag® T7 SP6 Flexi® Vectors(Cat.# G1681,G1691)用于大肠杆菌和 SP6 无细胞表达系统中具有 C- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。
这些载体经优化适用于无细胞表达系统。 注意:Flexi® 载体带有致死性 barnase 基因,可以减少载体构建过程中不带有插入片段的阴性克隆的产生。barnase 基因可被插入的目的 DNA 片段所替代。所购买的这一类载体在没有插入目的 DNA 片段的情况下,带有空载体的常用实验室大肠杆菌菌株不能生长。 特点 - 优点• 系统可选:选择传统(MCS)和 Flexi® 克隆体验 HaloTag® 技术带来的好处。 • 双标签:兼顾蛋白溶解性和 HaloTag® 技术作为标记的优势,并可再利用和应用镍亲和技术纯化。 • 通用克隆:您可以随意选择各种表达系统和融合标签的方向,然后可以根据需要转向其它其他载体(对于 Flexi® 系统)。 • 省时:芽孢杆菌 RNA 酶插入(Flexi® 系统)减少了背景克隆的数量,克隆片段可以有效地转移。 应用• 使用 HaloTag® 技术进行细菌蛋白的表达和纯化 • 使用 HaloTag® 技术进行无细胞蛋白表达和纯化 • His6 介导纯化用于共价标记 HaloTag® 配体的融合蛋白 更多信息,请见 Protocols & Applications Guide。 |
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