这些载体用于在大肠杆菌和无细胞表达系统中通过 T7 RNA 聚合酶启动子进行 HaloTag® 融合蛋白的诱导表达。表达水平高度依赖于蛋白质的特性，但是一般 N- 末端 HaloTag® 融合蛋白（如 pFN18A/ K，Cat.# G2751，G2681）可以提高表达水平、增强复性，并提高所表达蛋白的溶解度。有两种类型的HaloTag® 载体：应用传统克隆方法的多克隆位点（MCS）载体和 Flexi® 系统载体。

Flexi® 载体系统是一种简单的蛋白编码序列的定向克隆方法。该方法建立在两种位点稀有的限制性酶 Sgfl 和 Pmel 基础上，可以将蛋白编码区在不同的Flexi® 载体之间转换，而不需要重新测序，该方法快速、有效、保真度高。只有两个 N- 末端标记的载体或者从 N- 末端到 C- 末端的载体可以发生直接转化，多克隆位点载体和几个 Flexi® 系统载体一个 His6-HaloTag® 双重标签。这种双标签能够使用重复利用的镍树脂进行蛋白质纯化，保留了 HaloTag® 共价标记属性。 

多克隆位点载体
pH6HTN His6HaloTag® T7 Vector（Cat.#G7971）用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 N- 末端 His6-HaloTag® 双标签蛋白的表达。

pH6HTC His6HaloTag® T7 Vector（Cat.# G8031）用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 C- 末端 His6-HaloTag® 双标签蛋白的表达。

Flexi® 系统载体
pF1A/K T7 Flexi® Vectors（Cat.# C8441，C8451）用于无标签蛋白的表达。

pFN18A/KHaloTag® T7 Flexi® Vectors（Cat.# G2751，G2681）用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 N- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。

pFN19A/KHaloTag® T7 SP6 Flexi® Vectors（Cat.# G1891，G1841）用于大肠杆菌和 T7 SP6 无细胞表达系统中具有 N- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。这些载体经优化适用于无细胞表达系统。

pFC20A/KHaloTag® T7 SP6 Flexi® Vectors（Cat.# G1681，G1691）用于大肠杆菌和 SP6 无细胞表达系统中具有 C- 末端 HaloTag® 蛋白的表达。

这些载体经优化适用于无细胞表达系统。
pFN29A/K His6HaloTag® T7 Flexi® Vectors（Cat.# G8261，G8331）用于大肠杆菌T7 无细胞表达系统中具有 N- 末端 His6-HaloTag® 双标签蛋白的表达。
pFC30A/K His6HaloTag® T7 Flexi® Vectors（Cat.# G8321，G8381）用于大肠杆菌T7 无细胞表达系统中具有 C- 末端 His6-HaloTag® 双标签蛋白的表达。

注意：Flexi® 载体带有致死性 barnase 基因，可以减少载体构建过程中不带有插入片段的阴性克隆的产生。barnase 基因可被插入的目的 DNA 片段所替代。所购买的这一类载体在没有插入目的 DNA 片段的情况下，带有空载体的常用实验室大肠杆菌菌株不能生长。

特点 - 优点

• 系统可选：选择传统（MCS）和 Flexi® 克隆体验 HaloTag® 技术带来的好处。

• 双标签：兼顾蛋白溶解性和 HaloTag® 技术作为标记的优势，并可再利用和应用镍亲和技术纯化。

• 通用克隆：您可以随意选择各种表达系统和融合标签的方向，然后可以根据需要转向其它其他载体（对于 Flexi® 系统）。

• 省时：芽孢杆菌 RNA 酶插入（Flexi® 系统）减少了背景克隆的数量，克隆片段可以有效地转移。

应用

• 使用 HaloTag® 技术进行细菌蛋白的表达和纯化

• 使用 HaloTag® 技术进行无细胞蛋白表达和纯化

• His6 介导纯化用于共价标记 HaloTag® 配体的融合蛋白

更多信息，请见 Protocols & Applications Guide。