双杂交系统是用于体内蛋白与蛋白相互作用检测的极为有力的工具。此系统的基础是某些转录因子中的模块结构域:即一种能够结合特异 DNA 序列的 DNA 结合区结构域和一种能够与基础转录元件相互作用的转录激活结构域。与 DNA 结合结构域相关的转录激活结构域将促进 RNA 聚合酶 II 复合体在 TATA 盒的组装并增加转录。在 CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System(CheckMate™ 哺乳动物双杂交系统中), DNA 结合结构域与转录激活结构域由不同的质粒产生,当一个融合在 DNA 结合结构域的蛋白(“X”)与第二个融合在转录激活结构域上的蛋白(“Y”)相互作用时,二者紧密相关。此系统中,蛋白 X 和 Y 的相互作用引起报告基因的转录。 特点 - 优点
• 哺乳动物细胞系统:可在选择的细胞系内进行蛋白相互作用研究。此处使用的蛋白更接近于其天然构象。翻译后修饰(诸如糖基化、磷酸化和乙酰化)等功能均被更好地保留。
• 易于定量:可使用 Dual-Luciferase® 检测系统进行定量检测。 • 有内对照:海肾萤光素酶可对转染效率进行归一化处理。 • 快速的瞬时检测:转染后 2 天即可得到结果,酵母系统则需要 3-4 天。 • 稳定转染:pACT 载体带有新霉素磷酸基转移酶基因,能够用于稳定转染的筛选。 应用• 确认可疑蛋白间的相互作用,并确定涉及的结构域和残基 更多信息,请参见“Protocols & Applications Guide”。 |
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