这些载体用于在大肠杆菌和无细胞表达系统中通过 T7 RNA聚合酶启动子进行 HQ- 和 GST- 标签蛋白的诱导表达。HQ 标签和多组氨酸标签(His)对于镍离子的亲和性相当,可以结合所有的 His- 结合表面和树脂。在某些情况下,HQ- 标签蛋白在低浓度的咪唑作用下可以从亲和柱上洗脱下来,用于一些下游反应如酶促反应。就 His 标签来说,蛋白质可以在细菌,昆虫和哺乳动物系统中表达,可以在天然或变性的条件下纯化。GST 标签已成功应用于提高含标签蛋白在大肠杆菌表达过程中的溶解度。 Flexi® 载体系统是一种简单的蛋白编码序列的定向克隆方法。该方法建立在两种位点稀有的限制性酶 Sgfl 和 Pmel 基础上,可以将蛋白编码区在不同的Flexi® 载体之间转换,而不需要重新测序,该方法快速、有效、保真度高。只有两个 N- 末端标记的载体或者从 N- 末端到 C- 末端的载体可以发生直接转化。
pFN2A/K (GST) Flexi® Vectors 用于大肠杆菌和 T7 无细胞表达系统中具有 N- 末端 GST 标签蛋白的表达。 特点 - 优点• 易于实现且可靠:选择传统的 His- 亲和树脂和 GST- 亲和树脂用于标准蛋白纯化和原核表达应用。 • 节约成本:Ni(His- 亲和柱)和 GST(GST- 亲和)树脂可重复利用,节省费用。 • 通用克隆:可以随意选择各种表达系统和融合标签的方向,然后可以根据需要转向其它其他载体(对于Flexi® 系统)。 • 省时:芽孢杆菌 RNA 酶插入(Flexi® 系统)减少了背景克隆的数量,克隆片段可以有效地转移。 应用• 利用GST标签技术进行离体细菌和细胞蛋白的表达和纯化 • 利用HQ标签技术进行离体细菌和细胞蛋白的表达和纯化 更多信息,请见Protocols & Applications Guide。 |
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