概述:
Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilusDNA聚合酶的一部分,具有5´→3´DNA聚合酶活性,但不具有5´→3´外切核酸酶活性
来源:
来源于 E.coli菌株,此菌株含有来自Bacillusstearothermophilus DNA 聚合酶的基因,该基因缺失了5' →3' 外切核酸酶结构域。应用基因重组技术,将麦芽糖结合蛋白(MBP)基因与该基因融合表达,融合蛋白经纯化后再在体外切除掉 MBP,纯化后的聚合酶不含 MBP(1)。
反应缓冲液:
1X ThermoPol Reaction Buffer
[20 mM Tris-HCl (pH 8.8 @ 25°C), 10 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 2 mM MgSO4, 0.1% Triton X-100]。
单位定义:
1 单位指 65 ℃条件下,30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
活性检测条件:
50 mM KCl, 20 mM Tris-HCl (pH 8.8),10 mM MgCl2, 30 nM M13mp18 ssDNA, 70 nM M13测序引物 (-47) 24 mer, 200 μM dATP, 200 μM dCTP,200 μM dGTP, 100 μM [3H] dTTP, 100 μg/ml BSA 和酶。65°C温育。
浓度:
8,000 units/ml 和 120,00
贮存条件:
50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 0.1% Triton X-100和50%甘油。贮存于-20°C。0 units/ml。
热失活:
80°C 10分钟。
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注意事项:
Bst DNA 聚合酶不具有 3' →5' 外切酶活性。
长期贮存需加入 100 μg/ml BSA 或 0.1% Triton X-100。
建议反应温度不要超过 70 ℃。
Bst DNA 聚合酶不能用于热循环测序或 PCR。
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