T4 DNA连接酶 (高浓度5X) 20000 units

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T4 DNA连接酶 (高浓度5X) 20000 units

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货号：M0202T

品牌：NEB

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应用：

■ 提高反应效率

■ 粘性末端和平齐末端均可连接

■ 限制性酶切片段的克隆（3）

■ 将 linker 或 adapter 连接到 DNA 片段的平齐末端

■ 室温或 16 ℃ 均有活性

概述：

该酶催化契合的双链DNA或RNA的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切口(1) 。

反应条件：

1X T4 DNA 连接酶缓冲液 [50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25 ℃），10 mM MgCl₂，10 mM DTT，1 mM ATP]。推荐 DNA 5' 末端浓度为 0.1－1.0 μM。

质保声明：

无核酸内切酶和外切酶污染。每批T4 DNA 连接酶均通过模拟克隆实验进行检测，该实验可以检测出连接后 DNA 末端的任何损伤。结果表明超过 99.9% 的 DNA 末端保持完好。

贮存条件：

50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 7.4), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 200 μg/ml BSA 和 50% 甘油,-20°C 贮存。

室温连接反应：为方便起见，连接反应可以在室温（20-25 ℃）条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。平齐末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA连接酶反应 2 小时，或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。另外，NEB 快速连接试剂盒 [NEB #M2200S（30 次反应），或 NEB #M2200L（150 次反应）] 可在室温下 5 分钟内完成平齐和粘性末端的连接。
使用注意：与大肠杆菌 DNA 连接酶需要 NAD⁺作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。稀释后的 T4 DNA 连接酶应保存于 -20 ℃，50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）。如稀释后马上使用，则可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液（NEBuffers）或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。

室温连接反应：

为方便起见，连接反应可以在室温（20-25 ℃）条件下进行。粘性末端连接：在 20 μl反应体系中加入 1 μl T4 DNA 连接酶，反应 10 分钟。平齐末端连接：在 20 μl 反应体系中加入 1 μl T4 DNA连接酶反应 2 小时，或者加入 1 μl 高浓度 T4 DNA 连接酶反应 10 分钟。

另外，NEB 快速连接试剂盒 [NEB #M2200S（30 次反应），或 NEB #M2200L（150 次反应）] 可在室温下 5 分钟内完成平齐和粘性末端的连接。

使用注意：

与大肠杆菌 DNA 连接酶需要 NAD⁺作辅因子不同，T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。

稀释后的 T4 DNA 连接酶应保存于 -20 ℃，50% 甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液 A，NEB #B8001）。如稀释后马上使用，则可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加 1 mM ATP，连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液（NEBuffers）或在 T4 DNA 多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。