pGEM® -T 载体系统是克隆PCR 产物的方便系统。pGEM®-T载体是通过EcoRV 酶切pGEM®-5Zf(+) 载体,并在两个3`末端加入胸腺嘧啶构建的。pGEM®-T 载体插入位点3`-T 突出端可极大提高PCR 产物的连接效率,因为3`-T突出端可以防止载体的自身环化,并且为某些热稳定性聚合酶产生的PCR 产物提供一个匹配碱基。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3` 端加上一个脱氧腺苷酸。 pGEM® -T 载体多克隆区T 突出端的两侧均有BstZI 酶切位点,使用BstZI 单酶消化即可释放插入片段。也可选用适当的双酶消化释放插入片段。pGEM® -T载体系统II 除了pGEM® -T 载体系统I 所有成分外,还包括JM109 感受态细胞。 特点 - 优点
. 快速连接:使用2X 快速连接缓冲液(2X Rapid Ligation Buffer)可以使连接反应在室温下1 小时内完成。
. 蓝/ 白筛选:pGEM® -T 载体包含有T7 和SP6 RNA 聚合酶启动子,分别位于β - 半乳糖苷酶的α - 肽编码区内多克隆位点的两侧。α - 肽的插入失活允许在指示培养基上用颜色直接筛选重组克隆。 . f1 复制起始位点::可用于制备单链DNA。 |
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