Product Brief

Instructions

注意事项：  

1.  准备一台可以测定A540的酶标仪或微量分光光度计。

2.  初次使用建议先取少量样品做好预实验。

3.  使用时建议戴手套防止污染。

使用方法：  

1.  把细胞培养在96孔培养板内，密度1000-10000/孔,每孔加入200ul细胞培养液，并给予药物刺激。

2.  至待检测时间点，如果培养液中的药物推测不会对后续检测产生干扰，直接加入20ul中性红染色液；如果培养液中的药物可能会对后续检测产生干扰，先用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次，随后加入200ul细胞培养液，并加入20ul中性红染色液。

3.  细胞培养箱内孵育2小时。（对于细胞密度非常低，细胞代谢速率非常慢的情况，可以把孵育时间延长到3-4个小时）。

4.  去除含有中性红染色液的细胞培养液，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。

5.  加入200ul中性红检测液，室温摇床上裂解10分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。

6.  测定样品的A540，可以选择690nm作为参考波长。

7.  同时设置调零孔，对照孔。

常见问题：  

1.  中性红染色液长期存放会产生沉淀。可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以过滤去除沉淀后继续使用，不会影响使用效果。因为染色液中的中性红本来就是过量的。

2.  96孔板在细胞培养过程中会存在蒸发问题。在加入中性红染色液前，如果培养液存在明显的蒸发问题，会影响细胞的生长状态，并严重影响后续的检测结果。