A 电泳和转膜
1)溶解蛋白质分子量,每管加200μl的1×SDS上样缓冲液(100μl dd H2O+100μl 2×SDS上样缓冲液)。混合均匀,多个小管分装(每份10μl)保存。
2)蛋白质分子量标准溶液于100℃加热2-3分钟。
3)离心1-2分钟后上样,每道5-10μl。
4)常规SDS-PAGE电泳
5)转膜
B 检测
1)将膜放入封闭液(5%BSA)中室温封闭1小时。TBS-T洗膜2次,每次5-10分钟。
2)以适当的比例稀释后的streptavidin-HRP(博士德有售,货号:BA1088效价1:2000-10000)室温孵育1-2小时,TBS-T洗膜3次,每次10分钟。
3)进行化学发光检测,方法按照其使用的产品说明书进行。
1、2道是蛋白分子量 在4%浓缩胶 8%分离胶Tris-Glycine SDS-PAGE。 1道为5μl的蛋白分子量标准溶液;2道为10μl的蛋白分子量标准溶液。在胶片上曝光30 秒的显影结果。
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