此红细胞裂解液为10X溶液,使用时必须用去离子水稀释至1X工作液。
对于组织细胞样品:
1. 新鲜组织经过消化处理,通过适当方法分散成细胞悬液。
2. 4℃ 400-500g离心弃上清取沉淀。
3. 用去离子水将10X的红细胞裂解液稀释成1X的工作液,加入3-5倍细胞体积的1X的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,在冰上裂解4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入3-5ml的红细胞裂解液。
4. 4℃400-500g离心5分钟,弃红色上清。
5. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤3和步骤4一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
6. 加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀洗涤1-2次,4℃ 400-500g离心2-3分钟,弃上清。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
7. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行细胞计数,调节密度,进行下一步染色。
对于血液样品:
1. 取新鲜抗凝血,4℃400-500g离心5分钟,离心弃上清。
2. 用去离子水将10X的红细胞裂解液稀释成1X的工作液,加入10倍细胞体积的1X的红细胞裂解液,轻轻吹打混匀,在冰上裂解4-5分钟,并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。例如细胞沉淀的体积为1ml,则加入10ml的红细胞裂解液。
3. 4℃400-500g离心5分钟,弃红色上清。
4. 如果发现红细胞裂解不完全,可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。
5. 加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液,重悬沉淀洗涤1-2次,4℃400-500g离心2-3分钟,弃上清。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。
6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行细胞计数,调节密度,进行下一步染色。
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