Product Brief

Instructions

1. 收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,细胞增殖实验每孔加入2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入5000个细胞（96孔板，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，每孔0-10ul，设3-5个复孔。
2. 5%CO2，37℃孵育16-48小时，置显微镜下观察。
3. 每孔加入10微升MTT染色液，继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
4. 每孔加入100微升Formanzan溶解液，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察发现formazan全部溶解。通常37℃孵育4小时左右，紫色结晶会全部溶解。如果紫色结晶较小较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大较多，溶解的时间会长一些。（也可以每孔加入50ul的DMSO，细胞培养箱孵育10min，紫色结晶基本全部溶解，加入DMSO之前需去除细胞培养液。）
5. 在酶联免疫检测仪570nm测定吸光度。如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。