碱性条件下,蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物。此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂(Folin试剂)还原,产生深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物),颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法灵敏度比双缩脲法高100倍,定量范围为5~100 μg/ml蛋白质。经典的Lowry法的主要缺点是由Reagent A和B按照一定比例配置成的碱性铜试剂(Reagent C)不稳定,需要当天配制,经典的Lowry法产生的颜色稳定性也不高,在反应20~120 min内变化9.2%。本试剂盒采用一种改进的、即用型稳定的碱性铜试剂代替经典Lowry法的Reagent A、B、C,使得实验操作更加简单、便捷,反应产生的蓝色复合物能够稳定存在至少2 h;而且该稳定型碱性铜试剂在4°C、避光的条件下可稳定保存至少6个月以上,实验制得的标准曲线与经典方法基本吻合。采用酶标板可使用1,000次或分光光度法100次。
稳定型碱性铜试剂; Folin-酚试剂(1N); BSA蛋白质标准液(1mg/ml)
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